돼지 β- 인간 chorionic 성선 자극 호르 핀 (β-HCG) 효소-연결 면역 분석 키트 지침 설명서이 키트는 연구 용도만을위한 것입니다.
마약 이름 :
일반 이름 : 돼지 베타 인간 융모 성 생식선 자극 호르핀 (β-HCG) ELISA 키트
사용의 목적 :
이 키트는 돼지 혈청, 혈장 및 관련 액체 샘플에서 β- 인간 융모 성 성선 자극 호르핀 (β-HCG)의 측정에 사용됩니다.
실험 원리 :
이 키트는 이중 항체 샌드위치 방법을 사용하여 시편에서 돼지 β- 인간 chorionic 성선 자극 호르핀 (β-HCG)의 수준을 결정합니다. 미세 다공성 플레이트를 정제 된 돼지 β- 인간 chorionic 성선 자극 호르 핀 (β-HCG) 항체로 코팅하여 고체 상 항체를 생성 하였다. 돼지 β- 휴먼 chorionic 성선 자극 트로 핀 (β-HCG), HRP- 표지 된 인간 Villous 성선 자극 트로 핀 β (β-HCG) 항체와 결합하여 항체-항원-엔진 표지 된 항체 복합체를 형성하고, 철저한 세척 후, 기질 TMB IS. 색상 개발을 위해 추가되었습니다. TMB는 HRP 효소의 촉매하에 파란색으로, 그리고 산의 작용 하에서 최종 노란색으로 전환된다. 색 깊이는 샘플에서 인간 villous gonadotropin β (β-HCG)와 양의 상관 관계가있다. 흡광도 (OD 값)를 450 nm의 파장에서 마이크로 플레이트 리더로 측정하고, 샘플에서 돼지 β- 인간 융모 성 생식선 자극 호르 핀 (β-HCG)의 농도를 표준 곡선에 의해 계산 하였다.
키트 구성 :
1 20 회 농축 세척 용액 30ml × 1 병 7 정지 용액 6ml × 1 병
2 효소 라벨 시약 6ml × 1 병 8 표준 (270μg / L) 0.5ml × 1 병
3 효소 라벨 코팅 플레이트 12 웰스 × 8 스트립 9 표준 희석 1.5ml × 1 병
4 샘플 희석제 6ml × 1 병 10 지침 1 사본
5 개발자 솔루션 6ml × 1 병 11 2 밀봉 필름
6 개발자 B 액체 6ml × 1 / 병 12 밀봉 가방 1
표본 요구 사항 :
1. 수집 후 가능한 빨리 시편을 추출하고 관련 문헌에 따라 추출이 수행되며, 추출 후 가능한 빨리 실험을 수행해야합니다. 테스트를 즉시 수행 할 수없는 경우 시편은 -20 °로 저장 될 수 있지만 반복적 인 동결 및 해동은 피해야합니다.
2. NAN3을 함유하는 샘플은 검출 될 수 없다.
단계 :
1. 표준 제품의 희석 및 로딩 : 효소 코팅 플레이트에 10 개의 표준 웰을 설정하고, 첫 번째 및 두 번째 웰에 100 μL의 표준 제품을 추가 한 다음, 첫 번째 및 두 번째 웰에 표준 제품을 추가하십시오. 50μL의 희석제, 잘 혼합; 그런 다음 첫 번째 우물과 두 번째 우물에서 100μl를 가져 와서 각각 세 번째와 네 번째 웰에 추가 한 다음 각각 50μL의 표준 희석 용액을 세 번째 및 네 번째 웰에 추가 한 다음 잘 섞은 다음 세 번째 및 네 번째 웰에서 각각 50μl를 섭취하십시오. 그리고 그것을 폐기 한 다음, 각각 다섯 번째와 여섯 번째 웰에 각각 50μl를 첨가 한 다음 각각 5 번째와 여섯 번째 우물에 표준 희석 용액의 50UL을 추가하고 잘 섞는다. 혼합 후 5 번째와 여섯 번째 우물에서 50μL를 가져 와서 각각 7 위와 8 번째 우물에 추가하십시오. 그런 다음 각각 일곱 번째와 여덟 번째 우물에 각각 50μL의 표준 희석 용액을 첨가하십시오. 8 개의 우물에서 50μl를 가져 와서 아홉 번째와 열 번째 우물에 추가하십시오. 그런 다음 각각 9 번째 및 10 번째 웰에 표준 희석 용액을 각각 첨가하십시오. 혼합 후, 아홉 번째와 10 번의 우물에서 50μL를 가져 와서 폐기하십시오. (희석 후, 각 웰의 부피는 50μL이고, 농도는 180μg / L, 120μg / L, 60μg / L, 30μg / L, 15μg / L)이다.
2. 샘플 추가 : 블랭크 웰을 설정합니다 (블랭크 컨트롤 웰은 샘플과 효소 시약을 추가하지 않으며 나머지 단계는 동일합니다) 및 샘플 우물을 테스트합니다. 효소 코팅 된 플레이트의 시험 샘플 우물에 40μL의 샘플 희석제를 첨가 한 다음 10μL의 시험 샘플을 첨가한다 (샘플의 최종 희석은 5 배이다). 샘플을 추가하고 샘플을 마이크로 플레이트의 우물 바닥에 추가하고 우물의 벽을 만지지 말고 부드럽게 흔들어 섞으십시오.
3. 인큐베이션 : 밀봉 필름으로 플레이트를 밀봉하고 37 ℃에서 30 분 동안 배양합니다.
4. 혼합 용액 : 증류수로 20 회 농축 세척 액체를 20 회 희석하고 예약
5. 세척 : 밀봉 필름을 조심스럽게 껍질을 벗기고, 액체를 폐기하고, 건조하고, 세척 용액으로 각 우물을 채우고, 30 초 동안 서서 버리고 5 번 반복하고 건조시킵니다.
6. 효소 첨가 : 빈 웰을 제외한 50μL의 효소 라벨 시약을 각 우물에 첨가하십시오.
7. 인큐베이션 : 작업은 3과 동일합니다.
8. 세척 : 작업은 5와 동일합니다.
9. 색상 개발 : 각각의 우물에 50μL의 개발자 A를 추가 한 다음 50μL의 개발자 B를 추가하고 부드럽게 섞은 다음 어둠 속에서 37 ℃에서 색상을 개발합니다.
15 분.
10. 종결 : 반응을 중지하기 위해 각 웰에 50μL의 정지 용액을 첨가합니다 (이때 파란색은 노란색으로 변합니다).
11. 결정 : 빈 에어컨과 450 nm 파장으로 각 웰의 흡광도 (OD 값)를 측정합니다. 정지 용액을 추가 한 후 15 분 이내에 측정을 수행해야합니다.
계산:
표준의 농도를 Asccissa 및 OD 값으로서의 OD 값으로 취하는 것은 좌표 용지에 표준 곡선을 그립니다. 그리고 샘플의 OD 값에 따라 표준 곡선에서 해당 농도를 찾으십시오. 희석 계수를 곱한다. 또는 표준의 농도를 사용하여 표준 곡선의 선형 회귀 방정식을 OD 값으로 계산하고, 샘플의 OD 값을 방정식으로 대체하고, 샘플 농도를 계산하고, 희석 계수로 곱하여 실제 농도를 얻습니다. 샘플.
지침:
1. 키트는 냉장 환경에서 꺼내어 사용하기 전에 15-30 분 동안 실온에서 평형화해야합니다. 개구부 후 효소 코팅 된 판이 실패하면 스트립은 밀봉 된 백에 보관해야합니다.
2. 결정은 농축 세척 액체에서 침전 될 수 있으며, 이는 희석 동안 수조에 가열되고 용해 될 수 있으며, 세척 중에 결과가 영향을받지 않을 것이다.
3. 샘플러는 샘플 첨가의 각 단계에서 사용해야하며 테스트 오류를 피하기 위해 정확도를 정기적으로 점검해야합니다. 5 분 이내에 샘플링 시간을 제어하는 것이 가장 좋습니다. 시편이 많은 경우 발리 건을 사용하여 샘플을 추가하는 것이 좋습니다.
4. 각 측정의 동시에 표준 곡선을 만들면 이중 구멍을 만드는 것이 가장 좋습니다. 시편에서 테스트 할 물질의 함량이 너무 높으면 (샘플의 OD 값이 표준 우물의 첫 번째 우물의 OD 값보다 큰 경우) 특정 다중 (n 회)로 희석하십시오. 샘플 희석제를 결정한 다음 결정합니다. 다중 (× N × 5).
5. 밀봉 필름은 교차 오염을 피하기 위해 일회성으로 제한됩니다.
6. 기판을 빛에서 멀리 유지하십시오.
7. 지침을 엄격하게 따르면 테스트 결과는 마이크로 플레이트 리더에 의해 결정되어야합니다.
8. 모든 샘플, 세척 액체 및 다양한 폐기물은 전염병으로 처리되어야합니다.
9.이 시약의 다른 배치 성분은 혼합되어서는 안된다.
10. 영어 매뉴얼에 차이가있는 경우 영어 매뉴얼이 우선합니다.
시험 범위 :
10μg / L -200μg / L
사양:
96 서빙 / 박스 저장 조건 및 만료 날짜
1. 키트 보관 :; 2-8 ℃.
2. 유효성 : 6 개월