Domuz-insan-insan koryonik gonadotropin (β-HCG) enzim bağlantılı immünoanaliz kiti talimat kılavuzu bu kit sadece araştırma kullanımı içindir.
İlaç Adı:
Jenerik Adı: Domuz Beta İnsan Koryonik Gonadotropin (β-HCG) ELISA Kiti
Kullanımın amacı:
Bu kit, domuz serumu, plazma ve ilgili sıvı örneklerinde β-insan koryonik gonadotropinin (β-HCG) belirlenmesi için kullanılır.
Deneysel Prensip:
Bu kit, numunedeki domuz-insan koryonik gonadotropin (β-HCG) seviyesini belirlemek için çift antikor sandviç yöntemini kullanır. Mikro gözenekli plakalar, katı faz antikorları yapmak için saflaştırılmış domuz-insan koryonik gonadotropin (β-HCG) antikoru ile kaplandı. Domuz-insan koryonik gonadotropin (β- HCG), daha sonra bir antikor-antijen-enzim) antikoru oluşturmak için HRP etiketli insan villöz gonadotropin β (β-HCG) antikoru ile birleştirildiğinde, substrat-etiketli antikor kompleksi ve tam yıkama işleminden sonra, substrat TMB, Renk geliştirme için eklendi. TMB, HRP enziminin katalizi altında ve asit etkisi altında son sarı içine maviye dönüştürülür. Renk derinliği, numunedeki insan villöz gonadotropin β (β-HCG) ile pozitif ilişkilidir. Absorbans (OD değeri), 450 nm dalga boyunda bir mikroplaka okuyucu ile ölçüldü ve numunedeki domuz-insan koryonik gonadotropin (β-HCG) konsantrasyonu standart bir eğri ile hesaplandı.
Kit kompozisyonu:
1 20 kat konsantre yıkama çözeltisi 30ml × 1 şişe 7 durdurma çözeltisi 6ml × 1 şişe
2 Enzim Etiket Reaktifi 6ml × 1 Şişe 8 Standardı (270μg / L) 0.5ml × 1 şişe
3 Enzim Etiket Kaplamalı Plaka 12 Kuyular × 8 Şeritler 9 Standart Dileşim 1.5ml × 1 şişe
4 Örnek Seyreltici 6ml × 1 Şişe 10 Talimatlar 1 Kopya
5 Geliştirici A Çözüm 6ml × 1 Şişe 11 2 Sızdırmazlık Film
6 Geliştirici B Sıvı 6ml × 1 / Şişe 12 Mühürlü Torba 1
Örnek gereksinimleri:
1. Örnekler toplandıktan sonra mümkün olan en kısa sürede çıkarılır ve ekstraksiyon ilgili literatüre göre gerçekleştirilir ve deneyler ekstraksiyondan sonra mümkün olan en kısa sürede yapılmalıdır. Test derhal gerçekleştirilemezse, numune -20 ℃ 'de saklanabilir, ancak tekrarlanan donma ve çözülme önlenmelidir
2. Nan3 içeren numuneler tespit edilemez çünkü Nan3 yaban turpu peroksidaz (HRP) aktivitesini inhibe ettiğinden.
Adımlar:
1. Standart ürünlerin seyreltilmesi ve yüklenmesi: Enzim kaplı plaka üzerinde 10 standart kuyucuyu ayarlayın, birinci ve ikinci kuyulara 100 ul standart ürün ekleyin ve ardından birinci ve ikinci kuyulara standart ürünleri ekleyin. 50μl seyreltici, iyice karıştırın; Daha sonra ilk kuyudan ve ikinci kuyudan 100μl alın ve bunları sırasıyla üçüncü ve dördüncü kuyulara ekleyin ve daha sonra sırasıyla üçüncü ve dördüncü kuyulara 50μl standart seyreltme çözümü ekleyin, daha sonra üçüncü ve dördüncü kuyularda her biri 50μl alın ve atın, sonra beşinci ve altıncı kuyulara her biri 50μl ekleyin ve ardından sırasıyla beşinci ve altıncı kuyulara standart seyreltme çözeltisi ekleyin ve iyice karıştırın; Karıştırdıktan sonra, beşinci ve altıncı kuyulardan 50μl alın ve sırasıyla yedinci ve sekizinci kuyulara ekleyin. Daha sonra yedinci ve sekizinci kuyulara 50μl standart seyreltme çözeltisi ekleyin. Sekiz kuyudan 50μl alın ve dokuzuncu ve onuncu kuyulara ekleyin. Daha sonra sırasıyla dokuzuncu ve onuncu kuyulara 50μl standart seyreltme çözeltisi ekleyin. Karıştırdıktan sonra dokuzuncu ve onuncu kuyulardan 50μl alın ve atın. (Seyreltmeden sonra, her oyukun hacmi 50μl'dir ve konsantrasyonlar 180μg / L, 120μg / L, 60μg / L, 30μg / L, 15μg / L'dir).
2. Örnek ekleyin: Boş kuyular ayarlayın (boş kontrol kuyuları örnekler ve enzim reaktifleri eklemeyin, adımların geri kalanı aynıdır) ve test edilecek numune kuyuları. Enzim kaplı plakanın test örneği kuyusuna 40μl numune seyreltici ekleyin ve ardından 10μl test örneğini ekleyin (numunenin son seyreltmesi 5 kattır). Numuneyi ekleyin ve numuneyi mikroplakın kuyusunun altına ekleyin, kuyunun duvarına dokunmamaya çalışın, karıştırmak için hafifçe çalkalayın.
3. İnkübasyon: Plakayı sızdırmazlık filmi ile kapatın ve 30 dakika boyunca 37 ° C'de inkübe edin.
4. Karıştırma Çözümü: 20 kez konsantre yıkama sıvısını damıtılmış su ile 20 kez seyreltin ve yedek
5. Yıkama: Sızdırmazlık filmini dikkatlice soyun, sıvıyı atın, kuru döndürün, her kuyuyu yıkama çözeltisi ile doldurun, 30 saniye bekletin ve atın, 5 kez tekrarlayın ve kurutun.
6. Enzim ekleyin: boş kuyu hariç her oyuğa 50μl enzim etiket reaktifi ekleyin.
7. İnkübasyon: Operasyon 3 ile aynıdır.
8. Yıkama: Operasyon 5 ile aynıdır.
9. Renk Geliştirme: Her kuyuya 50μl geliştirici A ekleyin ve ardından 50μl geliştirici B ekleyin, nazikçe karıştırın ve karanlıkta 37 ℃ renkte renk geliştirin
15 dakika.
10. Fesih: Reaksiyonu durdurmak için her oyuğa 50μl durdurma çözeltisi ekleyin (şu anda mavi sarıya dönecektir).
11. Tespit: Her kuyucuğun absorbansını (OD değeri) sıfır ve 450 nm dalga boyunda boş klima ile sırayla ölçün. Ölçüm, durdurma çözeltisi eklendikten sonra 15 dakika içinde yapılmalıdır.
Hesaplama:
Standarın konsantrasyonunu apsis ve OD değerini koordinat olarak alarak, koordinat kağıdına standart bir eğri çizin ve numunenin OD değerine göre standart eğriden karşılık gelen konsantrasyonu bulun; seyreltme faktörü ile çarpmak; veya standart eğrinin doğrusal regresyon denklemini OD değeri ile hesaplayın, numunenin OD değerini denkleme yerleştirin, numune konsantrasyonunu hesaplayın ve seyreltme faktörü ile çarpın ve gerçek konsantrasyonunu elde etmek için bu örnek.
Önlemler:
1. Kit, buzdolabına alınmış ortamdan çıkarılmalı ve kullanımdan önce 15-30 dakika boyunca oda sıcaklığında dengelenmelidir. Enzim kaplı plaka açıldıktan sonra kapatılırsa, şerit kapalı bir torbada saklanmalıdır.
2. Kristaller, seyreltme sırasında bir su banyosunda ısıtılabilen ve çözülebilen konsantre yıkama sıvısında çöktürülebilir ve sonuçlar yıkama sırasında etkilenmeyecektir.
3. Örnekleyici numune eklemenin her adımında kullanılmalı ve test hatalarını önlemek için doğruluk düzenli olarak kontrol edilmelidir. Örnekleme süresini 5 dakika içinde kontrol etmek en iyisidir. Birçok örnek varsa, numune eklemek için bir voleybol tabancası kullanılması önerilir.
4. Lütfen her ölçümün aynı zamanda standart bir eğri yapın, en iyisi bir çift delik yapmaktır. Örnekte test edilecek maddenin içeriği çok yüksekse (numunenin OD değeri, standart kuyunun ilk kuyusunun OD değerinden daha büyükse), lütfen belirli bir çoklu (n kez) ile seyreltin. Numune seyreltici ve sonra belirleyin. Çoklu (× n × 5).
5. Sızdırmazlık filmi çapraz kontaminasyonu önlemek için bir kerelik kullanımla sınırlıdır.
6. Lütfen substratı ışıktan uzak tutun.
7. Talimatları kesinlikle takip edin ve test sonuçları mikroplaka okuyucu tarafından belirlenmelidir.
8. Tüm numuneler, sıvı yıkama ve çeşitli atıklar bulaşıcı ajanlar olarak muamele edilmelidir.
9. Bu reaktifin farklı gruplarının bileşenleri karıştırılmamalıdır.
10. İngiliz kılavuzu ile herhangi bir fark varsa, İngiliz kılavuzu geçerli olacaktır.
Sınav aralığı:
10μg / L -200μg / L
Şartname:
96 porsiyon / kutu depolama koşulları ve son kullanma tarihi
1. kit depolama :; 2-8 ℃.
2. Geçerlilik: 6 ay