وقت اختبار الحمل

Human Anti-HCG الأجسام المضادة IGA (HCG-IGA) ELISA

تعليمات مجموعة لاستخدام هذا الكاشف مخصص للبحث فقط

الغرض: يتم استخدام هذه المجموعة لتحديد محتوى الأجسام المضادة لـ HCG IGA (HCG-IGA) في المصل البشري والبلازما والعينات السائلة ذات الصلة.

المبدأ التجريبي:
تستخدم هذه المجموعة طريقة شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة لتحديد مستوى الأجسام المضادة لـ HCG IgA (HCG-IGA) في العينة. تم تغليف الألواح الدقيقة مع الأجسام المضادة للأجسام المضادة للجسم المضاد لـ HCG (HCG-IGA) لإعداد الأجسام المضادة للمرحلة الصلبة. تمت إضافة الأجسام المضادة لـ HCG IgA (HCG-IGA) إلى الميكرويلات المغلفة مع MAB بدورها ، ثم تسمى مع HRP الأجسام المضادة المضادة للإنسان الماعز لتشكيل مركب مضاد للأجسام المضادة للأجسام المضادة. بعد الغسيل الشامل ، تتم إضافة الركيزة TMB لتطوير الألوان. يتم تحويل TMB إلى أزرق تحت حفز إنزيم HRP ، وإلى الأصفر النهائي تحت عمل الحمض. يرتبط عمق اللون بشكل إيجابي مع IGA المضاد لـ HCG (HCG-IGA) في العينة. تم قياس الامتصاصية (قيمة OD) مع قارئ الألواح الدقيقة على طول موجة يبلغ 450 نانومتر ، وتم حساب تركيز الجسم المضاد لـ HCG IgA (HCG-IGA) في العينة بواسطة منحنى قياسي.

تكوين مجموعة:
تكوين KIT 48 Well Configuration 96 تعليمات تخزين التكوين البئر 1 الجزء 1 جزء من لوحة الختم 2 قطعة (48) 2 قطعة (96)
حقيبة واحدة مختومة ولوحة طلاء واحدة من الإنزيم 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃ المعيار المحفوظ: 54pg / ml 0.5ml × 1 زجاجة 0.5 مل × 1 زجاجة قياسية محفوظة زجاجة ML × 1 من الكواشف المسمى الإنزيم المخزنة في 2-8 ℃ 3 مل × 1 زجاجة 6 مل × 1 زجاجات من عينة مخففة في 2-8 ℃ 3 مل × 1 زجاجة 6 مل × 1 زجاجات من تخزين الألوان في 2 -8 ℃ كاشف محلول 3 مل × 1 زجاجة 6 مل × 1 زجاجة 2-8 درجة مئوية مطور التخزين B 3 مل × 1 زجاجة 6 مل × 1 زجاجة 2-8 درجة مئوية محلول التخزين 3 مل × 1 زجاجة 6 مل × 1 زجاجة 2- تخزين محلول الغسيل المركّز عند 8 ℃ (20 مل × 20 مرة) × 1 زجاجة (20 مل × 30 مرة) × 1 زجاجة في 2-8 ℃
1. مصل: تخثر درجة حرارة الغرفة بشكل طبيعي لمدة 10-20 دقيقة ، تم الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة (2000-3000 دورة في الدقيقة). اجمع طافًا بعناية وطرد مركزي مرة أخرى إذا ظهر ترسب أثناء التخزين.
2. البلازما: يجب اختيار سترات EDTA أو الصوديوم كمضاد للتخثر وفقًا لمتطلبات العينة ، المخلوطة لمدة 10-20 دقيقة ، وطردها لمدة 20 دقيقة (2000-3000 دورة في الدقيقة). جمع طاف بعناية. إذا كانت هناك ترسبات أثناء التخزين ، فيجب أن يتم الطرد المركزي مرة أخرى.
3. البول: تم جمعها في أنابيب معقمة وطردها لمدة 20 دقيقة (2000-3000 دورة في الدقيقة). جمع طاف بعناية. إذا كانت المترسبة تتشكل أثناء التخزين ، والطرد المركزي مرة أخرى. الجنبي والاستسقاء ، التنفيذ المرجعي السائل النخاعي.
4. ثقافة الخلية طاف: عند اكتشاف المكونات المفرزة ، اجمع مع أنبوب معقم. الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة (2000-3000 دورة في الدقيقة). جمع طاف بعناية. عند اكتشاف المكونات داخل الخلايا ، قم بتخفيف تعليق الخلية باستخدام PBS (Ph7.2-7.4) ، وسيصل تركيز الخلية إلى حوالي مليون / مل. من خلال التجميد المتكرر والذوبان ، يتم تدمير الخلايا ويتم إطلاق المكونات داخل الخلايا. الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة (2000-3000 دورة في الدقيقة). جمع طاف بعناية. إذا كانت هناك ترسبات أثناء التخزين ، فيجب أن يتم الطرد المركزي مرة أخرى.
5. تنظيم العينة: بعد قطع العينة ، وزنها. أضف كمية معينة من برنامج تلفزيوني ، ph7.4. تجميد بسرعة وحفظ مع النيتروجين السائل للاستخدام لاحقًا. بعد ذوبان العينة ، لا يزال يحافظ على درجة حرارة 2-8 درجة مئوية. أضف كمية معينة من PBS (ph7.4) وتجانس العينة مع دليل أو متجانسة. الطرد المركزي لمدة 20 دقيقة (2000-3000 دورة في الدقيقة). جمع طاف بعناية. بعد التنقيب ، يتم اختبار جزء ، والباقي يتجمد للاستخدام في المستقبل.
6. يجب استخراج العينة في أقرب وقت ممكن بعد التجميع. يجب تنفيذ الاستخراج وفقًا للأدب ذي الصلة. يجب تنفيذ التجربة في أقرب وقت ممكن بعد الاستخراج. إذا كان لا يمكن إجراء الاختبار على الفور ، فيمكن تخزين العينة في -20 ℃ ، ولكن ينبغي تجنب التجميد المتكرر والذوبان.
7. لا يمكن اكتشاف العينة التي تحتوي على NAN3 لأن NAN3 يمنع نشاط بيروكسيداز الفجل (HRP).
خطوات:
1. تخفيف وتحميل المنتجات القياسية: قم بتعيين 10 آبار قياسية على اللوحة المغلفة بالإنزيم ، وأضف 100 ميكرولتر من المنتجات القياسية في الآبار الأولى والثانية ، ثم أضف المنتجات القياسية في الآبار الأولى والثانية. 50 ميكرولتر من التخفيف ، تخلط جيدا. ثم خذ 100 ميكرولتر من البئر الأول والبئر الثانية وأضفها إلى الآبار الثالثة والرابعة على التوالي ، ثم أضف 50 ميكرولتر من محلول التخفيف القياسي إلى الآبار الثالثة والرابعة على التوالي ، ثم اخلطي 50 ميكرولتر كل منهما في الآبار الثالثة والرابعة وتجاهلها ، ثم أضف 50 ميكرولتر لكل منها إلى الآبار الخامسة والسادسة ، ثم أضف 50ul من محلول التخفيف القياسي إلى الآبار الخامسة والسادسة على التوالي ، واخلطها جيدًا ؛ بعد الاختلاط ، خذ 50 ميكرولتر من الآبار الخامسة والسادسة وأضفها إلى الآبار السابعة والثامنة على التوالي. ثم أضف 50 ميكرولتر من محلول التخفيف القياسي إلى الآبار السابعة والثامنة على التوالي. خذ 50 ميكرولتر من الآبار الثمانية وأضفها إلى الآبار التاسعة والعاشرة. ثم أضف 50 ميكرولتر من محلول التخفيف القياسي إلى الآبار التاسعة والعاشرة على التوالي. بعد الاختلاط ، خذ 50 ميكرولتر من الآبار التاسعة والعاشرة وتجاهل. (بعد التخفيف ، يكون حجم كل بئر 50 ميكرولتر ، والتركيزات هي 36pg / ml ، 24pg / ml ، 12pg / ml ، 6pg / ml ، 3pg / ml).
2. إضافة عينات: إعداد آبار فارغة (لا تضيف آبار التحكم الفارغة عينات وكواشف إنزيم ، وبقية الخطوات هي نفسها) وآبار العينة المراد اختبارها. أضف 40 ميكرولتر من عينة مخففة إلى بئر اختبار بئر اللوحة المغلفة بالإنزيم ، ثم أضف 10 ميكرولتر من عينة الاختبار (التخفيف النهائي للعينة هو 5 مرات). أضف العينة وأضف العينة إلى أسفل بئر الألواح الدقيقة ، حاول ألا تلمس جدار البئر ، واهتز بلطف للمزج.
3. الحضانة: قم بإغلاق اللوحة مع فيلم الختم واحتضانه عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
4. محلول الخلط: تخفيف 30 مرة (20 مرة من 48T) سائل الغسيل المركّز بالماء المقطر 30 مرة (20 مرة من 48T) ثم استخدمها.
5. الغسيل: قم بتقطيع فيلم الختم بعناية ، وتجاهل السائل ، ودوره جافًا ، وملء كل بئر مع محلول الغسيل ، واتركه لمدة 30 ثانية وتجاهل ، وكرر 5 مرات وتجف.
6. أضف إنزيم: أضف 50 ميكرولتر من كاشف تسمية الإنزيم إلى كل بئر ، باستثناء بئر فارغة.
7. الحضانة: العملية هي نفس 3.
8. الغسيل: العملية هي نفس 5.

9. تطوير اللون: أضف 50 ميكرولتر من المطور A إلى كل بئر ، ثم أضف 50 ميكرولتر من المطور B ، وخلط بلطف ، وعرضه في 37 ℃ لمدة 15 دقيقة في الظلام.
10. الإنهاء: أضف 50 ميكرولتر من محلول الإيقاف إلى كل بئر لإيقاف رد الفعل (في هذا الوقت سوف يتحول الأزرق إلى أصفر).
11. التحديد: قياس الامتصاصية (قيمة OD) لكل بئر بالتسلسل مع مكيف الهواء الفارغ عند الصفر وطول موجة 450 نانومتر. يجب إجراء القياس في غضون 15 دقيقة بعد إضافة الحل النهائي.
احتياطات:
1. يجب معايرة المجموعة في درجة حرارة الغرفة لمدة 15-30 دقيقة قبل إخراج البيئة المبردة. إذا تم فتح اللوحة المغلفة لعلامة الإنزيم ، فيجب تخزين الشريط في كيس مغلق.
2. يمكن ترسيب البلورات في سائل الغسيل المركّز ، والذي يمكن تسخينه وتذوبه في حمام مائي أثناء التخفيف ، ولن تتأثر النتائج أثناء الغسيل.
3. يجب استخدام أخذ العينات في كل خطوة من خطوة إضافة العينة ، ويجب فحص الدقة بانتظام لتجنب أخطاء الاختبار. من الأفضل التحكم في وقت أخذ العينات في غضون 5 دقائق. إذا كان هناك العديد من العينات ، فمن المستحسن استخدام مسدس تسديدة لإضافة عينات.

4. يرجى وضع منحنى قياسي في نفس الوقت من كل قياس ، من الأفضل صنع ثقب مزدوج. إذا كان محتوى المادة المراد اختباره في العينة مرتفعًا جدًا (تكون قيمة OD للعينة أكبر من قيمة OD للبئر الأولى من البئر المعيارية) ، فيرجى تخفيفها مع عدة أوقات (n) من عينة مخففة ثم تحديدها. متعددة (× N × 5).
5. يقتصر فيلم الختم على الاستخدام لمرة واحدة لتجنب التلوث المتبادل.
6. يرجى الحفاظ على الركيزة بعيدا عن الضوء.
7. اتبع بشكل صارم التعليمات ، ويجب تحديد نتائج الاختبار بواسطة قارئ الألواح الدقيقة.
8. يجب التعامل مع جميع العينات وغسل السوائل والنفايات المختلفة كعوامل معدية.
9. يجب عدم خلط مكونات دفعات مختلفة من هذا الكاشف.
10. إذا كان هناك أي اختلاف مع الدليل الإنجليزي ، فإن الدليل الإنجليزي يسود.
عملية حسابية:
أخذ تركيز المعيار مثل abscissa وقيمة OD كإحداثي ، ارسم منحنى قياسي على ورقة الإحداثيات ، وابحث عن التركيز المقابل من المنحنى القياسي وفقًا لقيمة OD للعينة ؛ ثم اضرب عامل التخفيف ؛ احسب معادلة الانحدار الخطي للمنحنى القياسي مع قيمة OD ، واستبدل قيمة OD للعينة في المعادلة ، وحساب تركيز العينة ، وضربها بواسطة عامل التخفيف للحصول على التركيز الفعلي للعينة.

(هذه الصورة للرجوع إليها فقط)

أداء مجموعة:
1. معامل الارتباط R بين الانحدار الخطي للعينة والتركيز المتوقع أكثر من 0.990.
2. يجب أن تكون الدفعة والموافقة أقل من 9 ٪ و 11 ٪ على التوالي
نطاق الفحص:
1pg / ml -45pg / ml
ظروف التخزين وفترة الصلاحية:
1. تخزين المجموعة: 2-8 ℃.
2. الصلاحية: 6 أشهر