الخنازير β-human الغدد التناسلية المشيمية (β-HCG) دليل تعليمات التعليمات المناعية المرتبطة بالإنزيم هذه المجموعة للبحث فقط.
اسم المخدرات:
الاسم العام: مجموعة ELISA الخنازير بيتا
الغرض من الاستخدام:
يتم استخدام هذه المجموعة لتحديد الغدد التناسلية المشيمية (β-HCG) في مصل الخنازير والبلازما والعينات السائلة ذات الصلة.
المبدأ التجريبي:
تستخدم هذه المجموعة طريقة شطيرة الأجسام المضادة المزدوجة لتحديد مستوى الغدد التناسلية المشيمية البرازينية (β-HCG) في العينة. تم تغليف الألواح الدقيقة مع الأجسام المضادة من الغدد التناسلية المشيمية (β-HCG) من الخنازير (β-HCG) لصنع الأجسام المضادة للمرحلة الصلبة. بعد ذلك ، جنبا إلى جنب مع الأجسام المضادة الغدد التناسلية الغدد التناسلية (β-HCG) من الخنازير ، ثم ، ثم جنبا إلى جنبا وأضاف لتطوير الألوان. يتم تحويل TMB إلى أزرق تحت حفز إنزيم HRP ، وإلى الأصفر النهائي تحت عمل الحمض. يرتبط عمق اللون بشكل إيجابي مع الغدد التناسلية البشرية (β-HCG) في العينة. تم قياس الامتصاصية (قيمة OD) مع قارئ الألواح الدقيقة على طول موجة يبلغ 450 نانومتر ، وتم حساب تركيز الغدد التناسلية المشيمية البرازينية (β-HCG) في العينة بواسطة منحنى قياسي.
تكوين مجموعة:
1 20 مرة محلول غسيل مركّز 30 مل × 1 زجاجة 6 ملام × 1 زجاجة
2 زجاجة تسمية 2 مل × 1 زجاجة 8 (270 ميكروغرام / لتر) 0.5 مل × 1 زجاجة
3 ملصق إنزيم لوحة مغلفة 12 بئر × 8 شرائط 9 تخفيفات قياسية 1.5 مل × 1 زجاجة
4 عينة مخففة 6 مل × 1 زجاجة 10 تعليمات 1 نسخة
5 مطور حل 6 مل × 1 زجاجة 11 2 فيلم ختم
6 مطور ب سائل 6 مل × 1 / زجاجة 12 حقيبة مختومة 1
متطلبات العينة:
1. يتم استخراج العينات في أسرع وقت ممكن بعد التجميع ، ويتم تنفيذ الاستخراج وفقًا للأدبيات ذات الصلة ، ويجب إجراء التجارب في أقرب وقت ممكن بعد الاستخراج. إذا تعذر إجراء الاختبار على الفور ، فيمكن تخزين العينة في -20 ℃ ، ولكن يجب تجنب التجميد المتكرر والذوبان
2. لا يمكن اكتشاف العينات التي تحتوي على NAN3 لأن NAN3 يمنع نشاط بيروكسيداز الفجل (HRP).
خطوات:
1. تخفيف وتحميل المنتجات القياسية: قم بتعيين 10 آبار قياسية على اللوحة المغلفة بالإنزيم ، وأضف 100 ميكرولتر من المنتجات القياسية في الآبار الأولى والثانية ، ثم أضف المنتجات القياسية في الآبار الأولى والثانية. 50 ميكرولتر من التخفيف ، تخلط جيدا. ثم خذ 100 ميكرولتر من البئر الأول والبئر الثانية وأضفها إلى الآبار الثالثة والرابعة على التوالي ، ثم أضف 50 ميكرولتر من محلول التخفيف القياسي إلى الآبار الثالثة والرابعة على التوالي ، ثم اخلطي 50 ميكرولتر كل منهما في الآبار الثالثة والرابعة وتجاهلها ، ثم أضف 50 ميكرولتر لكل منها إلى الآبار الخامسة والسادسة ، ثم أضف 50ul من محلول التخفيف القياسي إلى الآبار الخامسة والسادسة على التوالي ، واخلطها جيدًا ؛ بعد الاختلاط ، خذ 50 ميكرولتر من الآبار الخامسة والسادسة وأضفها إلى الآبار السابعة والثامنة على التوالي. ثم أضف 50 ميكرولتر من محلول التخفيف القياسي إلى الآبار السابعة والثامنة على التوالي. خذ 50 ميكرولتر من الآبار الثمانية وأضفها إلى الآبار التاسعة والعاشرة. ثم أضف 50 ميكرولتر من محلول التخفيف القياسي إلى الآبار التاسعة والعاشرة على التوالي. بعد الاختلاط ، خذ 50 ميكرولتر من الآبار التاسعة والعاشرة وتجاهل. (بعد التخفيف ، يكون حجم كل بئر 50 ميكرولتر ، وتركيزات 180 ميكروغرام / لتر ، 120 ميكروغرام / لتر ، 60 ميكروغرام / لتر ، 30 ميكروغرام / لتر ، 15 ميكروغرام / لتر).
2. إضافة عينات: إعداد آبار فارغة (لا تضيف آبار التحكم الفارغة عينات وكواشف إنزيم ، وبقية الخطوات هي نفسها) وآبار العينة المراد اختبارها. أضف 40 ميكرولتر من عينة مخففة إلى بئر اختبار بئر اللوحة المغلفة بالإنزيم ، ثم أضف 10 ميكرولتر من عينة الاختبار (التخفيف النهائي للعينة هو 5 مرات). أضف العينة وأضف العينة إلى أسفل بئر الألواح الدقيقة ، حاول ألا تلمس جدار البئر ، واهتز بلطف للمزج.
3. الحضانة: قم بإغلاق اللوحة مع فيلم الختم واحتضانه عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
4. محلول الخلط: تخفيف 20 مرة سائل الغسيل المركّز بالماء المقطر 20 مرة واحتفظ
5. الغسيل: قم بتقطيع فيلم الختم بعناية ، وتجاهل السائل ، ودوره جافًا ، وملء كل بئر مع محلول الغسيل ، واتركه لمدة 30 ثانية وتجاهل ، وكرر 5 مرات وتجف.
6. أضف إنزيم: أضف 50 ميكرولتر من كاشف تسمية الإنزيم إلى كل بئر ، باستثناء بئر فارغة.
7. الحضانة: العملية هي نفس 3.
8. الغسيل: العملية هي نفس 5.
9. تطوير اللون: أضف 50 ميكرولتر من المطور A إلى كل بئر ، ثم أضف 50 ميكرولتر من المطور B ، وخلط بلطف ، وتطور اللون في 37 ℃ في الظلام
15 دقيقة.
10. الإنهاء: أضف 50 ميكرولتر من محلول الإيقاف إلى كل بئر لإيقاف رد الفعل (في هذا الوقت سوف يتحول الأزرق إلى أصفر).
11. التحديد: قياس الامتصاصية (قيمة OD) لكل بئر بالتسلسل مع مكيف الهواء الفارغ عند الصفر وطول موجة 450 نانومتر. يجب إجراء القياس في غضون 15 دقيقة بعد إضافة محلول الإيقاف.
عملية حسابية:
أخذ تركيز المعيار مثل abscissa وقيمة OD كإحداثي ، ارسم منحنى قياسي على ورقة الإحداثيات ، وابحث عن التركيز المقابل من المنحنى القياسي وفقًا لقيمة OD للعينة ؛ تضاعف بعامل التخفيف ؛ أو استخدم تركيز المعيار ، قم بحساب معادلة الانحدار الخطي للمنحنى القياسي مع قيمة OD ، واستبدل قيمة OD للعينة في المعادلة ، وحساب تركيز العينة ، وضربها بواسطة عامل التخفيف للحصول العينة.
احتياطات:
1. يجب إخراج المجموعة من البيئة المبردة وأن تتوازن في درجة حرارة الغرفة لمدة 15-30 دقيقة قبل الاستخدام. إذا تم إلغاء لوحة الصفيحة المغلفة بالإنزيم بعد فتحها ، فيجب تخزين الشريط في كيس مغلق.
2. يمكن ترسيب البلورات في سائل الغسيل المركّز ، والذي يمكن تسخينه وتذوبه في حمام مائي أثناء التخفيف ، ولن تتأثر النتائج أثناء الغسيل.
3. يجب استخدام أخذ العينات في كل خطوة من خطوة إضافة العينة ، ويجب فحص الدقة بانتظام لتجنب أخطاء الاختبار. من الأفضل التحكم في وقت أخذ العينات في غضون 5 دقائق. إذا كان هناك العديد من العينات ، فمن المستحسن استخدام مسدس تسديدة لإضافة عينات.
4. يرجى وضع منحنى قياسي في نفس الوقت من كل قياس ، من الأفضل صنع ثقب مزدوج. إذا كان محتوى المادة التي سيتم اختبار عينة مخففة ثم تحديدها. متعددة (× N × 5).
5. يقتصر فيلم الختم على الاستخدام لمرة واحدة لتجنب التلوث المتبادل.
6. يرجى الحفاظ على الركيزة بعيدا عن الضوء.
7. اتبع بشكل صارم التعليمات ، ويجب تحديد نتائج الاختبار بواسطة قارئ الألواح الدقيقة.
8. يجب التعامل مع جميع العينات وغسل السوائل والنفايات المختلفة كعوامل معدية.
9. يجب عدم خلط مكونات دفعات مختلفة من هذا الكاشف.
10. إذا كان هناك أي اختلاف مع الدليل الإنجليزي ، فإن الدليل الإنجليزي يسود.
نطاق الفحص:
10μg / L -200μg / L
تخصيص:
96 حصص / شروط تخزين الصندوق وتاريخ انتهاء الصلاحية
1. تخزين مجموعة :؛ 2-8 ℃.
2. الصلاحية: 6 أشهر