Ανθρώπινο αντι-HCG αντίσωμα IgA (HCG-IGA) ELISA
Οι οδηγίες για το κιτ για χρήση αυτού του αντιδραστηρίου είναι μόνο για ερευνητική χρήση
Σκοπός: Αυτό το κιτ χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του περιεχομένου του IgA αντι-HCG IgA (HCG-IGA) στον ανθρώπινο ορό, το πλάσμα και τα σχετικά υγρά δείγματα.
Πειραματική αρχή:
Αυτό το κιτ χρησιμοποιεί τη μέθοδο σάντουιτς διπλού αντισώματος για να προσδιορίσει το επίπεδο του ανθρώπινου αντι-HCG αντίσωμα IgA (HCG-IGA) στο δείγμα. Οι μικροπορώδεις πλάκες επικαλύφθηκαν με καθαρισμένο αντισώμα IgA (HCG-IGA) αντισώματος αντισώματος ανθρώπινου αντι-HCG (HCG-IGA) για την παρασκευή αντισωμάτων στερεάς φάσης. Το αντι-ΗΟΓ αντίσωμα IgA (HCG-IGA) προστέθηκε στο μικροβόλο επικαλυμμένο με mAb με τη σειρά του και στη συνέχεια επισημάνθηκε με HRP το αντι-ανθρώπινο αντίσωμα κατσίκας δεσμεύεται για να σχηματίσει ένα σύμπλοκο αντισώματος αντισώματος-αντιγόνου-ενζύμου-επισημασμένου αντισώματος. Μετά από λεπτομερή πλύση, το υπόστρωμα TMB προστίθεται για την ανάπτυξη χρώματος. Το TMB μετατρέπεται σε μπλε κάτω από την κατάλυση του ενζύμου HRP και στο τελικό κίτρινο κάτω από τη δράση του οξέος. Το βάθος χρώματος συσχετίζεται θετικά με το IgA αντισώματος αντι-HCG (HCG-IGA) στο δείγμα. Η απορρόφηση (τιμή OD) μετρήθηκε με έναν αναγνώστη μικροπλακών σε μήκος κύματος 450 nm και η συγκέντρωση του ανθρώπινου αντι-HCG αντίσωμα IgA (HCG-IGA) στο δείγμα υπολογίστηκε με τυπική καμπύλη.
Σύνθεση κιτ:
Σύνθεση κιτ 48 Διαμόρφωση καλά 96 Οδηγίες αποθήκευσης διαμόρφωσης καλά 1 Μέρος 1 Μέρος σφράγισης Πλάκα πλάκας 2 τεμάχια (48) 2 κομμάτια (96)
Μία σφραγισμένη σακούλα και μία πλάκα επίστρωσης με ένζυμο 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃ διατηρημένο πρότυπο: 54pg / ml 0.5ml × 1 μπουκάλι 0.5ml × 1 διατηρημένο πρότυπο αραλμίδιο 1.5ml × 2-8 ℃ × 1 μπουκάλι 1,5 1,5 ΜΙ × 1 μπουκάλι αντιδραστηρίων επισημασμένων με ένζυμο αποθηκευμένα σε 2-8 ℃ 3 ml × 1 μπουκάλι 6 ml × 1 μπουκάλια αραιωτικού δείγματος στα 2-8 ℃ 3 ml × 1 μπουκάλι 6 ml × 1 μπουκάλια αποθήκευσης χρώματος στα 2 -8 ℃ αντιδραστήριο A Διάλυμα 3 ml × 1 μπουκάλι 6 ml × 1 μπουκάλι 2-8 ° C Προγραμματιστής αποθήκευσης Β διάλυμα 3 ml × 1 μπουκάλι 6 ml × 1 μπουκάλι 2-8 ° C αποθήκευση διαλύματος αποθήκευσης 3ml × 1 μπουκάλι 6ml × 1 μπουκάλι 2- Αποθηκεύστε το συμπυκνωμένο διάλυμα πλυσίματος στα 8 ℃ (20ml × 20 φορές) × 1 μπουκάλι (20ml × 30 φορές) × 1 μπουκάλι στα 2-8 ℃
1. Ορός: Η θερμοκρασία του δωματίου πλέκεται φυσικά για 10-20 λεπτά, φυγοκεντρήθηκε για περίπου 20 λεπτά (2000-3000 σ.α.λ.). Συλλέξτε ξανά το υπερκείμενο και φυγοκεντρούν ξανά εάν εμφανιστεί ένα ίζημα κατά τη διάρκεια της αποθήκευσης.
2. πλάσμα: Η EDTA ή το κιτρικό νάτριο θα πρέπει να επιλέγονται ως αντιπηκτικό σύμφωνα με τις απαιτήσεις του δείγματος, να αναμιγνύονται για 10-20 λεπτά και να φυγοκεντρήθηκαν για περίπου 20 λεπτά (2000-3000 σ.α.λ.). Συλλέξτε προσεκτικά το υπερκείμενο. Εάν ένα ίζημα σχηματίζεται κατά τη διάρκεια της αποθήκευσης, θα πρέπει να φυγοκεντρείται και πάλι.
3. ούρα: Συλλέγονται σε αποστειρωμένους σωλήνες και φυγοκεντρήθηκαν για περίπου 20 λεπτά (2000-3000 σ.α.λ.). Συλλέξτε προσεκτικά το υπερκείμενο. Εάν ένα ίζημα σχηματίζεται κατά τη διάρκεια της αποθήκευσης, φυγοκεντρούν ξανά. Υπεζωκοτικός και ασκίτης, υλοποίηση αναφοράς εγκεφαλονωτιαίου υγρού.
4. Υπεράντα κυτταροκαλλιέργεια: Όταν ανιχνεύετε εκκρινόμενα συστατικά, συλλέξτε με αποστειρωμένο σωλήνα. Φυγοκεντρική για περίπου 20 λεπτά (2000-3000 σ.α.λ.). Συλλέξτε προσεκτικά το υπερκείμενο. Κατά την ανίχνευση των συστατικών μέσα στα κύτταρα, αραιώστε την εναιώρημα κυττάρων με PBS (PH7.2-7.4) και η συγκέντρωση κυττάρων θα φτάσει περίπου 1 εκατομμύριο / mL. Μέσω της επαναλαμβανόμενης κατάψυξης και της απόψυξης, τα κύτταρα καταστρέφονται και τα ενδοκυτταρικά συστατικά απελευθερώνονται. Φυγοκεντρική για περίπου 20 λεπτά (2000-3000 σ.α.λ.). Συλλέξτε προσεκτικά το υπερκείμενο. Εάν ένα ίζημα σχηματίζεται κατά τη διάρκεια της αποθήκευσης, θα πρέπει να φυγοκεντρείται και πάλι.
5. Οργανώστε το δείγμα: Μετά την κοπή του δείγματος, ζυγίστε το. Προσθέστε ένα ορισμένο ποσό PBS, PH7.4. Γρήγορα παγώστε και αποθηκεύστε με υγρό άζωτο για μεταγενέστερη χρήση. Αφού το δείγμα λιώνει, εξακολουθεί να διατηρεί θερμοκρασία 2-8 ° C προσθέτει μια ορισμένη ποσότητα PBS (PH7.4) και ομογενοποιήστε το δείγμα με χειροκίνητο ή ομογενοποιητή. Φυγοκεντρική για περίπου 20 λεπτά (2000-3000 σ.α.λ.). Συλλέξτε προσεκτικά το υπερκείμενο. Μετά την υποπτεία, πρέπει να δοκιμαστεί ένα τμήμα και τα υπόλοιπα είναι παγωμένα για μελλοντική χρήση.
6. Το δείγμα πρέπει να εξαχθεί το συντομότερο δυνατό μετά τη συλλογή. Η εξαγωγή πρέπει να πραγματοποιείται σύμφωνα με τη σχετική βιβλιογραφία. Το πείραμα πρέπει να πραγματοποιηθεί το συντομότερο δυνατό μετά την εξαγωγή. Εάν η δοκιμή δεν μπορεί να εκτελεστεί αμέσως, το δείγμα μπορεί να αποθηκευτεί σε -20 ℃, αλλά πρέπει να αποφευχθεί η επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και η απόψυξη.
7. Το δείγμα που περιέχει NAN3 δεν μπορεί να ανιχνευθεί επειδή το NAN3 αναστέλλει τη δραστικότητα της υπεροξειδάσης χρένου (HRP).
Βήματα:
1. αραίωση και φόρτωση τυποποιημένων προϊόντων: Ρυθμίστε 10 πρότυπα φρεάτια στην επικαλυμμένη με ένζυμο πλάκα, προσθέστε 100 μΐ των τυποποιημένων προϊόντων στο πρώτο και δεύτερο πηγάδι και στη συνέχεια προσθέστε τα τυπικά προϊόντα στο πρώτο και το δεύτερο πηγάδι. 50μL αραιωτικού, ανακατέψτε καλά. Στη συνέχεια, πάρτε 100 μΐ από το πρώτο πηγάδι και το δεύτερο πηγάδι και προσθέστε τα στο τρίτο και το τέταρτο πηγάδι αντίστοιχα και στη συνέχεια προσθέστε 50 μΐ του τυπικού διαλύματος αραίωσης στο τρίτο και τέταρτο πηγάδι αντίστοιχα, ανακατέψτε καλά στη συνέχεια να πάρετε 50 μΐ το καθένα στο τρίτο και τέταρτο πηγάδι και απορρίψτε το, στη συνέχεια προσθέστε 50 μΐ το καθένα στο πέμπτο και το έκτο φρεάτιο και στη συνέχεια προσθέστε 50UL του τυπικού διαλύματος αραίωσης στο πέμπτο και το έκτο φρεάτιο αντίστοιχα και ανακατέψτε καλά. Μετά την ανάμειξη, πάρτε 50μL από το πέμπτο και το έκτο φρεάτιο και προσθέστε τα στην έβδομη και την όγδοη πηγάδια αντίστοιχα. Στη συνέχεια, προσθέστε 50μL τυπικού διαλύματος αραίωσης στην έβδομη και την όγδοη φρεάτια αντίστοιχα. Πάρτε 50μL από τα οκτώ πηγάδια και τα προσθέστε στο ένατο και το δέκατο πηγάδι. Στη συνέχεια, προσθέστε 50μL του τυπικού διαλύματος αραίωσης στο ένατο και το δέκατο πηγάδι αντίστοιχα. Μετά την ανάμειξη, πάρτε 50 μΐ από το ένατο και το δέκατο πηγάδι και απορρίψτε. (Μετά την αραίωση, ο όγκος κάθε φρεατίου είναι 50 μΐ και οι συγκεντρώσεις είναι 36pg / ml, 24pg / ml, 12pg / ml, 6pg / ml, 3pg / ml).
2. Προσθέστε δείγματα: Ρυθμίστε κενά φρεάτια (τα κενά φρεάτια ελέγχου δεν προσθέτουν δείγματα και ενζυμικά αντιδραστήρια, τα υπόλοιπα βήματα είναι τα ίδια) και τα δείγματα που πρέπει να δοκιμαστούν. Προσθέστε 40μL αραιωτικού δείγματος στο φρεάτιο δείγματος δοκιμής της επικαλυμμένης με ένζυμο πλάκα και στη συνέχεια προσθέστε 10 μΐ του δείγματος δοκιμής (η τελική αραίωση του δείγματος είναι 5 φορές). Προσθέστε το δείγμα και προσθέστε το δείγμα στο κάτω μέρος του φρεατίου του μικροπλάνου, προσπαθήστε να μην αγγίξετε το τοίχωμα του πηγαδιού, ανακινήστε απαλά για να ανακατέψετε.
3. επώαση: Σφραγίστε την πλάκα με το φιλμ σφράγισης και επωάστε στους 37 ° C για 30 λεπτά.
4. διάλυμα ανάμιξης: αραιώστε 30 φορές (20 φορές από 48T) συμπυκνωμένο υγρό πλυσίματος με αποσταγμένο νερό 30 φορές (20 φορές 48T) και στη συνέχεια χρησιμοποιήστε.
5. Πλύσιμο: Προσελκύστε προσεκτικά το φιλμ σφράγισης, απορρίψτε το υγρό, στεγνώστε, γεμίστε κάθε πηγάδι με το διάλυμα πλύσης, αφήστε το να σταθεί για 30 δευτερόλεπτα και να απορρίψει, να επαναλάβετε 5 φορές και να στεγνώσει.
6. Προσθέστε ένζυμο: Προσθέστε 50μL αντιδραστηρίου ετικετών ενζύμων σε κάθε φρεάτιο, εκτός από κενό καλά.
7. επώαση: Η λειτουργία είναι η ίδια με 3.
8. Πλύσιμο: Η λειτουργία είναι η ίδια με το 5.
9. Ανάπτυξη χρώματος: Προσθέστε 50μL του προγραμματιστή Α σε κάθε φρεάτιο και στη συνέχεια προσθέστε 50 μΐ του προγραμματιστή Β, ανακατέψτε απαλά και εμφανίστε στα 37 ℃ για 15 λεπτά στο σκοτάδι.
10. Τερματισμός: Προσθέστε 50μL διαλύματος στάσης σε κάθε φρεάτιο για να σταματήσετε την αντίδραση (αυτή τη στιγμή το μπλε θα μετατραπεί σε κίτρινο).
11. Προσδιορισμός: Μετρήστε την απορρόφηση (τιμή OD) κάθε φρεατίου σε ακολουθία με το κενό κλιματιστικό σε μηδέν και μήκος κύματος 450 nm. Η μέτρηση θα πρέπει να πραγματοποιείται εντός 15 λεπτών μετά την προσθήκη της τελικής λύσης.
Προφυλάξεις:
1. Το κιτ θα πρέπει να εξισορροπείται σε θερμοκρασία δωματίου για 15-30 λεπτά πριν αφαιρεθεί από το ψυγείο. Εάν η πλάκα επικαλυμμένης με ετικέτα ενζύμου είναι άβολη, η λωρίδα πρέπει να αποθηκεύεται σε σφραγισμένη τσάντα.
2. Οι κρύσταλλοι μπορούν να κατακρημνιστούν στο συμπυκνωμένο υγρό πλύσης, το οποίο μπορεί να θερμαίνεται και να διαλύεται σε υδατόλουτρο κατά τη διάρκεια της αραίωσης και τα αποτελέσματα δεν θα επηρεαστούν κατά τη διάρκεια της πλύσης.
3. Ο δειγματολήπτης πρέπει να χρησιμοποιείται σε κάθε βήμα της προσθήκης δείγματος και η ακρίβεια πρέπει να ελέγχεται τακτικά για να αποφευχθούν σφάλματα δοκιμής. Είναι καλύτερο να ελέγχετε τον χρόνο δειγματοληψίας εντός 5 λεπτών. Εάν υπάρχουν πολλά δείγματα, συνιστάται να χρησιμοποιήσετε ένα πυροβόλο όπλο για να προσθέσετε δείγματα.
4. Κάντε μια τυποποιημένη καμπύλη ταυτόχρονα κάθε μέτρησης, είναι καλύτερο να κάνετε μια διπλή τρύπα. Εάν το περιεχόμενο της ουσίας που πρέπει να δοκιμαστεί στο δείγμα είναι υπερβολικά υψηλό (η τιμή OD του δείγματος είναι μεγαλύτερη από την τιμή OD του πρώτου φρεατίου του τυποποιημένου φρεατίου), παρακαλούμε να το αραιώστε με ένα ορισμένο πολλαπλάσιο (n φορές) του το αραιωτικό δείγμα και στη συνέχεια προσδιορίστε το. Πολλαπλές (× n × 5).
5. Η μεμβράνη σφράγισης περιορίζεται σε εφάπαξ χρήση για να αποφευχθεί η διασταυρούμενη μόλυνση.
6. Παρακαλώ κρατήστε το υπόστρωμα μακριά από το φως.
7. Ακολουθήστε αυστηρά τις οδηγίες και τα αποτελέσματα των δοκιμών πρέπει να καθορίζονται από τον αναγνώστη μικροπλακών.
8. Όλα τα δείγματα, τα υγρά πλύσης και τα διάφορα απόβλητα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως μολυσματικοί παράγοντες.
9. Τα συστατικά διαφορετικών παρτίδων αυτού του αντιδραστηρίου δεν πρέπει να αναμειγνύονται.
10. Εάν υπάρχει κάποια διαφορά με το αγγλικό εγχειρίδιο, το αγγλικό εγχειρίδιο θα επικρατήσει.
Υπολογισμός:
Λαμβάνοντας τη συγκέντρωση του προτύπου ως την τετμήσια και την τιμή OD ως τεταγμένη, σχεδιάστε μια τυπική καμπύλη στο χαρτί συντεταγμένων και βρείτε την αντίστοιχη συγκέντρωση από την τυπική καμπύλη σύμφωνα με την τιμή OD του δείγματος. στη συνέχεια πολλαπλασιάστε με τον συντελεστή αραίωσης. Υπολογίστε την εξίσωση γραμμικής παλινδρόμησης της τυπικής καμπύλης με την τιμή OD, αντικαταστήστε την τιμή OD του δείγματος στην εξίσωση, υπολογίστε τη συγκέντρωση του δείγματος και πολλαπλασιάστε την με τον συντελεστή αραίωσης για να ληφθεί η πραγματική συγκέντρωση του δείγματος.
(Αυτή η εικόνα είναι μόνο για αναφορά)
Απόδοση κιτ:
1. Ο συντελεστής συσχέτισης R μεταξύ της γραμμικής παλινδρόμησης του δείγματος και της αναμενόμενης συγκέντρωσης είναι μεγαλύτερη από 0,990.
2. Η παρτίδα και η έγκριση πρέπει να είναι μικρότερες από 9% και 11% αντίστοιχα
Εύρος εξέτασης:
1pg / ml -45pg / ml
Συνθήκες αποθήκευσης και περίοδο εγκυρότητας:
1. Αποθηκεύστε το κιτ: 2-8 ℃.
2. Ισχύς: 6 μήνες