ΠΟΡΚΙΝΙΚΗ Β-Α-Ανθρώπινη Χοριονική Γόναδοτροπίνη (β-HCG) Εγχειρίδιο Immunoassay Kit Manual Αυτό το κιτ είναι μόνο για ερευνητική χρήση.
Όνομα φαρμάκου:
Γενικό Όνομα: Χορικό Βήτα Ανθρώπινο Χοριονικό Γοναδοτροπίνη (β-HCG) κιτ ELISA
Σκοπός της χρήσης:
Αυτό το κιτ χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της β-ανθρώπιου χοριακού γοναδοτροπίνης (β-HCG) στον ορό χοίρου, στο πλάσμα και στα σχετικά υγρά δείγματα.
Πειραματική αρχή:
Αυτό το κιτ χρησιμοποιεί τη μέθοδο σάντουιτς διπλού αντισώματος για να προσδιορίσει το επίπεδο της β-ανθρώπιου χοριοριονικού γοναδοτροπίνης (β-HCG) στο δείγμα. Οι μικροπορώδεις πλάκες επικαλύφθηκαν με καθαρισμένο χοίριο β-ανθρώπινο χοριοριονικό αντίσωμα γονιδοτροπίνης (β-HCG) για να κατασκευαστούν αντισώματα στερεάς φάσης. Η χοιρινική χοριακή γοναδοτροπίνη (β-HCG), στη συνέχεια, σε συνδυασμό με το σημασμένο με HRP ανθρώπινο βλεννώδη γονοτροπίνη β (β-HCG) αντίσωμα για να σχηματίσει ένα σύμπλεγμα αντισώματος αντισώματος-αντιγόνου-ενζύμου, Προστέθηκε για την ανάπτυξη χρωμάτων. Το TMB μετατρέπεται σε μπλε κάτω από την κατάλυση του ενζύμου HRP και στο τελικό κίτρινο κάτω από τη δράση του οξέος. Το βάθος χρώματος συσχετίζεται θετικά με το ανθρώπινο βλεννογαλάτο β (β-HCG) στο δείγμα. Η απορρόφηση (τιμή OD) μετρήθηκε με έναν αναγνώστη μικροπλακών σε μήκος κύματος 450 nm και η συγκέντρωση της β-ανθρώπιου χοριονικού γοναδοτροπίνης (β-HCG) στο δείγμα υπολογίστηκε με τυπική καμπύλη.
Σύνθεση κιτ:
1 20 φορές συμπυκνωμένο διάλυμα πλυσίματος 30ml × 1 μπουκάλι 7 διάλυμα διακοπής 6ml × 1 μπουκάλι
2 Αντιδραστήριο ετικετών ενζύμου 6ml × 1 μπουκάλι 8 πρότυπο (270μg / l) 0.5ml × 1 μπουκάλι
3 ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΠΙΝΑΚΑΣ 12 WELLS × 8 Strips 9 Τυποποιημένες αραιώσεις 1.5ml × 1 μπουκάλι
4 Δείγμα αραιωτικού 6ml × 1 μπουκάλι 10 Οδηγίες 1 αντίγραφο
5 προγραμματιστής Μια λύση 6ml × 1 μπουκάλι 11 2 φιλμ σφράγισης
6 προγραμματιστής Β υγρό 6ml × 1 / μπουκάλι 12 σφραγισμένη τσάντα 1
Απαιτήσεις δείγματος:
1. Τα δείγματα εξάγονται το συντομότερο δυνατό μετά τη συλλογή και η εξαγωγή πραγματοποιείται σύμφωνα με τη σχετική βιβλιογραφία και τα πειράματα πρέπει να διεξάγονται το συντομότερο δυνατό μετά την εξαγωγή. Εάν η δοκιμή δεν μπορεί να εκτελεστεί αμέσως, το δείγμα μπορεί να αποθηκευτεί σε -20 ℃, αλλά πρέπει να αποφευχθεί η επανειλημμένη κατάψυξη και η απόψυξη
2. Τα δείγματα που περιέχουν NAN3 δεν μπορούν να ανιχνευθούν επειδή το NAN3 αναστέλλει τη δραστικότητα της υπεροξειδάσης αγροτικής αγροτικής (HRP).
Βήματα:
1. αραίωση και φόρτωση τυποποιημένων προϊόντων: Ρυθμίστε 10 πρότυπα φρεάτια στην επικαλυμμένη με ένζυμο πλάκα, προσθέστε 100 μΐ των τυποποιημένων προϊόντων στο πρώτο και δεύτερο πηγάδι και στη συνέχεια προσθέστε τα τυπικά προϊόντα στο πρώτο και το δεύτερο πηγάδι. 50μL αραιωτικού, ανακατέψτε καλά. Στη συνέχεια, πάρτε 100 μΐ από το πρώτο πηγάδι και το δεύτερο πηγάδι και προσθέστε τα στο τρίτο και το τέταρτο πηγάδι αντίστοιχα και στη συνέχεια προσθέστε 50 μΐ του τυπικού διαλύματος αραίωσης στο τρίτο και τέταρτο πηγάδι αντίστοιχα, ανακατέψτε καλά στη συνέχεια να πάρετε 50 μΐ το καθένα στο τρίτο και τέταρτο πηγάδι και απορρίψτε το, στη συνέχεια προσθέστε 50 μΐ το καθένα στο πέμπτο και το έκτο φρεάτιο και στη συνέχεια προσθέστε 50UL του τυπικού διαλύματος αραίωσης στο πέμπτο και το έκτο φρεάτιο αντίστοιχα και ανακατέψτε καλά. Μετά την ανάμειξη, πάρτε 50μL από το πέμπτο και το έκτο φρεάτιο και προσθέστε τα στην έβδομη και την όγδοη πηγάδια αντίστοιχα. Στη συνέχεια, προσθέστε 50μL τυπικού διαλύματος αραίωσης στην έβδομη και την όγδοη φρεάτια αντίστοιχα. Πάρτε 50μL από τα οκτώ πηγάδια και τα προσθέστε στο ένατο και το δέκατο πηγάδι. Στη συνέχεια, προσθέστε 50μL του τυπικού διαλύματος αραίωσης στο ένατο και το δέκατο πηγάδι αντίστοιχα. Μετά την ανάμειξη, πάρτε 50 μΐ από το ένατο και το δέκατο πηγάδι και απορρίψτε. (Μετά την αραίωση, ο όγκος κάθε φρεατίου είναι 50 μΐ και οι συγκεντρώσεις είναι 180 μg / L, 120 μg / L, 60 μg / L, 30μg / L, 15μg / L).
2. Προσθέστε δείγματα: Ρυθμίστε κενά φρεάτια (τα κενά φρεάτια ελέγχου δεν προσθέτουν δείγματα και ενζυμικά αντιδραστήρια, τα υπόλοιπα βήματα είναι τα ίδια) και τα δείγματα που πρέπει να δοκιμαστούν. Προσθέστε 40μL αραιωτικού δείγματος στο φρεάτιο δείγματος δοκιμής της επικαλυμμένης με ένζυμο πλάκα και στη συνέχεια προσθέστε 10 μΐ του δείγματος δοκιμής (η τελική αραίωση του δείγματος είναι 5 φορές). Προσθέστε το δείγμα και προσθέστε το δείγμα στο κάτω μέρος του φρεατίου του μικροπλάνου, προσπαθήστε να μην αγγίξετε το τοίχωμα του πηγαδιού, ανακινήστε απαλά για να ανακατέψετε.
3. επώαση: Σφραγίστε την πλάκα με το φιλμ σφράγισης και επωάστε στους 37 ° C για 30 λεπτά.
4. διάλυμα ανάμιξης: αραιώστε 20 φορές συμπυκνωμένο υγρό πλυσίματος με αποσταγμένο νερό 20 φορές και αποθεματικό
5. Πλύσιμο: Προσελκύστε προσεκτικά το φιλμ σφράγισης, απορρίψτε το υγρό, στεγνώστε, γεμίστε κάθε πηγάδι με το διάλυμα πλύσης, αφήστε το να σταθεί για 30 δευτερόλεπτα και να απορρίψει, να επαναλάβετε 5 φορές και να στεγνώσει.
6. Προσθέστε ένζυμο: Προσθέστε 50μL αντιδραστηρίου ετικετών ενζύμων σε κάθε φρεάτιο, εκτός από κενό καλά.
7. επώαση: Η λειτουργία είναι η ίδια με 3.
8. Πλύσιμο: Η λειτουργία είναι η ίδια με το 5.
9. Ανάπτυξη χρώματος: Προσθέστε 50μL του προγραμματιστή Α σε κάθε φρεάτιο και στη συνέχεια προσθέστε 50μL του προγραμματιστή Β, ανακατέψτε απαλά και αναπτύξτε χρώμα στα 37 ℃ στο σκοτάδι
15 λεπτά.
10. Τερματισμός: Προσθέστε 50μL διαλύματος στάσης σε κάθε φρεάτιο για να σταματήσετε την αντίδραση (αυτή τη στιγμή το μπλε θα μετατραπεί σε κίτρινο).
11. Προσδιορισμός: Μετρήστε την απορρόφηση (τιμή OD) κάθε φρεατίου σε ακολουθία με το κενό κλιματιστικό σε μηδέν και μήκος κύματος 450 nm. Η μέτρηση θα πρέπει να πραγματοποιείται εντός 15 λεπτών μετά την προσθήκη της λύσης διακοπής.
Υπολογισμός:
Λαμβάνοντας τη συγκέντρωση του προτύπου ως την τετμήσια και την τιμή OD ως τεταγμένη, σχεδιάστε μια τυπική καμπύλη στο χαρτί συντεταγμένων και βρείτε την αντίστοιχη συγκέντρωση από την τυπική καμπύλη σύμφωνα με την τιμή OD του δείγματος. πολλαπλασιάστε με τον συντελεστή αραίωσης. ή να χρησιμοποιήσετε τη συγκέντρωση του προτύπου Υπολογίστε την εξίσωση γραμμικής παλινδρόμησης της τυπικής καμπύλης με την τιμή OD, αντικαταστήστε την τιμή OD του δείγματος στην εξίσωση, υπολογίστε τη συγκέντρωση του δείγμα το δείγμα.
Προφυλάξεις:
1. Το κιτ πρέπει να αφαιρεθεί από το ψυγείο και να εξισορροπηθεί σε θερμοκρασία δωματίου για 15-30 λεπτά πριν από τη χρήση. Εάν η επικαλυμμένη με ένζυμο πλάκα αποσυνδεθεί μετά το άνοιγμα, η λωρίδα θα πρέπει να αποθηκεύεται σε σφραγισμένη τσάντα.
2. Οι κρύσταλλοι μπορούν να κατακρημνιστούν στο συμπυκνωμένο υγρό πλύσης, το οποίο μπορεί να θερμαίνεται και να διαλύεται σε υδατόλουτρο κατά τη διάρκεια της αραίωσης και τα αποτελέσματα δεν θα επηρεαστούν κατά τη διάρκεια της πλύσης.
3. Ο δειγματολήπτης πρέπει να χρησιμοποιείται σε κάθε βήμα της προσθήκης δείγματος και η ακρίβεια πρέπει να ελέγχεται τακτικά για να αποφευχθούν σφάλματα δοκιμής. Είναι καλύτερο να ελέγχετε τον χρόνο δειγματοληψίας εντός 5 λεπτών. Εάν υπάρχουν πολλά δείγματα, συνιστάται να χρησιμοποιήσετε ένα πυροβόλο όπλο για να προσθέσετε δείγματα.
4. Κάντε μια τυποποιημένη καμπύλη ταυτόχρονα κάθε μέτρησης, είναι καλύτερο να κάνετε μια διπλή τρύπα. Εάν το περιεχόμενο της ουσίας που πρέπει να δοκιμαστεί στο δείγμα είναι υπερβολικά υψηλό (η τιμή OD του δείγματος είναι μεγαλύτερη από την τιμή OD του πρώτου φρεατίου του τυποποιημένου φρεατίου), παρακαλούμε να το αραιώστε με ένα ορισμένο πολλαπλάσιο (n φορές) του το αραιωτικό δείγμα και στη συνέχεια προσδιορίστε το. Πολλαπλές (× n × 5).
5. Η μεμβράνη σφράγισης περιορίζεται σε εφάπαξ χρήση για να αποφευχθεί η διασταυρούμενη μόλυνση.
6. Παρακαλώ κρατήστε το υπόστρωμα μακριά από το φως.
7. Ακολουθήστε αυστηρά τις οδηγίες και τα αποτελέσματα των δοκιμών πρέπει να καθορίζονται από τον αναγνώστη μικροπλακών.
8. Όλα τα δείγματα, τα υγρά πλύσης και τα διάφορα απόβλητα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως μολυσματικοί παράγοντες.
9. Τα συστατικά διαφορετικών παρτίδων αυτού του αντιδραστηρίου δεν πρέπει να αναμειγνύονται.
10. Εάν υπάρχει κάποια διαφορά με το αγγλικό εγχειρίδιο, το αγγλικό εγχειρίδιο θα επικρατήσει.
Εύρος εξέτασης:
10μg / l -200μg / l
προσδιορισμός:
96 συνθήκες αποθήκευσης και ημερομηνίας λήξης κουτιού και ημερομηνία λήξης
1. Αποθήκευση κιτ: 2-8 ℃.
2. Ισχύς: 6 μήνες