ELISA antibodi anti-HCG manusia (HCG-IGA)
Instruksi Kit untuk menggunakan reagen ini hanya untuk penggunaan penelitian
Tujuan: Kit ini digunakan untuk menentukan kandungan antibodi anti-HCG IgA (HCG-IGA) dalam serum manusia, plasma dan sampel cairan terkait.
Prinsip Eksperimental:
Kit ini menggunakan metode sandwich antibodi ganda untuk menentukan tingkat antibodi anti-HCG manusia IgA (HCG-IGA) dalam spesimen. Pelat mikroporous dilapisi dengan antibodi antibodi IgA anti-HCG manusia (HCG-IGA) yang dimurnikan untuk menyiapkan antibodi fase padat. IgA antibodi anti-HCG (HCG-IGA) ditambahkan ke microwell yang dilapisi dengan mAb secara bergantian, dan kemudian diberi label dengan HRP antibodi anti-manusia kambing mengikat untuk membentuk kompleks antibodi berlabel antibodi-antigen-enzim. Setelah mencuci secara menyeluruh, TMB substrat ditambahkan untuk pengembangan warna. TMB dikonversi menjadi biru di bawah katalisis enzim HRP, dan menjadi kuning terakhir di bawah aksi asam. Kedalaman warna berkorelasi positif dengan antibodi anti-HCG IgA (HCG-IGA) dalam sampel. Absorbansi (nilai OD) diukur dengan pembaca mikro pada panjang gelombang 450 nM, dan konsentrasi antibodi anti-HCG manusia IgA (HCG-IGA) dalam sampel dihitung oleh kurva standar.
Komposisi Kit:
KOMPOSISI KIT 48 Konfigurasi Sumur 96 Instruksi Penyimpanan Konfigurasi Sumur 1 Bagian 1 Bagian Piring Piring 2 Pieces (48) 2 Pieces (96)
Satu kantong tertutup dan satu pelat pelapis berlabel enzim 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃ Standar yang diawetkan: 54pg / mL 0,5ml × 1 botol 0,5ml × 1 Pengencer standar yang diawetkan 1,5ml × 2-8 ℃ × 1 botol 1,5 ML × 1 Botol reagen berlabel enzim yang disimpan pada 2-8 ℃ 3 ml × 1 botol 6 ml × 1 botol pengencer sampel pada 2-8 ℃ 3 ml × 1 botol 6 ml × 1 botol penyimpanan warna pada 2 -8 ℃ Reagen A Larutan 3 ml × 1 botol 6 ml × 1 botol 2-8 ° C Pengembang penyimpanan B Larutan 3 ml × 1 botol 6 ml × 1 botol 2-8 ° C SOPTING STOP SOLUSI 3ML × 1 BOTOL 6ML × 1 Botol 2- Simpan larutan pencucian pekat pada 8 ℃ (20ml × 20 kali) × 1 botol (20ml × 30 kali) × 1 botol pada 2-8 ℃
1. Serum: Darah suhu kamar terkoagulasi secara alami selama 10-20 menit, disentrifugasi selama sekitar 20 menit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan hati -hati dan centrifuge lagi jika endapan muncul selama penyimpanan.
2. Plasma: EDTA atau natrium sitrat harus dipilih sebagai antikoagulan sesuai dengan persyaratan spesimen, dicampur selama 10-20 menit, dan disentrifugasi selama sekitar 20 menit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan hati -hati. Jika endapan terbentuk selama penyimpanan, itu harus disentrifugasi lagi.
3. Urin: Dikumpulkan dalam tabung steril dan disentrifugasi selama sekitar 20 menit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan hati -hati. Jika endapan terbentuk selama penyimpanan, centrifuge lagi. Pleura dan asites, implementasi referensi cairan serebrospinal.
4. Supernatan kultur sel: Saat mendeteksi komponen yang disekresikan, kumpulkan dengan tabung steril. Centrifuge selama sekitar 20 menit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan hati -hati. Saat mendeteksi komponen di dalam sel, encerkan suspensi sel dengan PBS (Ph7.2-7.4), dan konsentrasi sel akan mencapai sekitar 1 juta / mL. Melalui pembekuan dan pencairan berulang, sel -sel dihancurkan dan komponen intraseluler dilepaskan. Centrifuge selama sekitar 20 menit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan hati -hati. Jika endapan terbentuk selama penyimpanan, itu harus disentrifugasi lagi.
5. Atur spesimen: Setelah memotong spesimen, timbanglah. Tambahkan sejumlah PBS, Ph7.4. Bekukan dengan cepat dan simpan dengan nitrogen cair untuk digunakan nanti. Setelah spesimen meleleh, masih mempertahankan suhu 2-8 ° C. Tambahkan sejumlah PBS (ph7.4) dan homogenisasi spesimen dengan manual atau homogenizer. Centrifuge selama sekitar 20 menit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan hati -hati. Setelah alikuot, sebagian harus diuji, dan sisanya dibekukan untuk digunakan di masa depan.
6. Spesimen harus diekstraksi sesegera mungkin setelah pengumpulan. Ekstraksi harus dilakukan sesuai dengan literatur yang relevan. Percobaan harus dilakukan sesegera mungkin setelah ekstraksi. Jika tes tidak dapat dilakukan segera, spesimen dapat disimpan pada -20 ℃, tetapi pembekuan dan pencairan berulang harus dihindari.
7. Sampel yang mengandung NAN3 tidak dapat dideteksi karena NAN3 menghambat aktivitas peroksidase horseradish (HRP).
Langkah:
1. Pengenceran dan pemuatan produk standar: Tetapkan 10 sumur standar pada pelat berlapis enzim, tambahkan 100 μl produk standar di sumur pertama dan kedua, dan kemudian tambahkan produk standar di sumur pertama dan kedua. 50μl pengencer, aduk rata; Kemudian ambil 100μL dari sumur pertama dan sumur kedua dan tambahkan mereka ke sumur ketiga dan keempat masing -masing, dan kemudian tambahkan 50μl larutan pengenceran standar masing -masing ke sumur ketiga dan keempat, aduk dengan baik kemudian ambil masing -masing 50μL di sumur ketiga dan keempat dan membuangnya, kemudian tambahkan 50μL masing -masing ke sumur kelima dan keenam, dan kemudian tambahkan 50UL dari solusi pengenceran standar masing -masing ke sumur kelima dan keenam, dan aduk rata; Setelah dicampur, ambil 50μL dari sumur kelima dan keenam dan tambahkan masing -masing ke sumur ketujuh dan kedelapan. Kemudian tambahkan 50μl larutan pengenceran standar masing -masing ke sumur ketujuh dan kedelapan. Ambil 50μL dari delapan sumur dan tambahkan ke sumur kesembilan dan kesepuluh. Kemudian tambahkan 50μl larutan pengenceran standar masing -masing ke sumur kesembilan dan kesepuluh. Setelah dicampur, ambil 50μL dari sumur kesembilan dan kesepuluh dan buang. (Setelah pengenceran, volume masing -masing sumur adalah 50μL, dan konsentrasi adalah 36pg / mL, 24pg / ml, 12pg / ml, 6pg / ml, 3pg / ml).
2. Tambahkan sampel: Mengatur sumur kosong (sumur kontrol kosong tidak menambahkan sampel dan reagen enzim, sisa langkahnya sama) dan sumur sampel yang akan diuji. Tambahkan 40μl pengencer sampel ke sumur sampel uji dari pelat yang dilapisi enzim, dan kemudian tambahkan 10μl sampel uji (pengenceran akhir sampel adalah 5 kali). Tambahkan sampel dan tambahkan sampel ke bagian bawah sumur mikro, cobalah untuk tidak menyentuh dinding sumur, kocok perlahan untuk dicampur.
3. Inkubasi: Tutup pelat dengan film penyegelan dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 30 menit.
4. Larutan pencampuran: encerkan 30 kali (20 kali 48T) cairan pencucian terkonsentrasi dengan air suling 30 kali (20 kali 48T) dan kemudian digunakan.
5. Cuci: Kupas dengan hati -hati dari film penyegelan, buang cairan, putar kering, isi masing -masing sumur dengan solusi pencucian, diamkan selama 30 detik dan buang, ulangi 5 kali dan keringkan.
6. Tambahkan enzim: Tambahkan 50μl reagen label enzim ke masing -masing sumur, kecuali kosong dengan sumur.
7. Inkubasi: Operasi sama dengan 3.
8. Cuci: Operasi sama dengan 5.
9. Pengembangan Warna: Tambahkan 50μl pengembang A ke masing -masing sumur, dan kemudian tambahkan 50μl pengembang B, aduk perlahan, dan tampilkan pada 37 ℃ selama 15 menit dalam gelap.
10. Pengakhiran: Tambahkan 50μl larutan berhenti ke setiap sumur untuk menghentikan reaksi (saat ini biru akan berubah menjadi kuning).
11. Penentuan: Ukur absorbansi (nilai OD) dari masing -masing sumur secara berurutan dengan AC kosong pada nol dan panjang gelombang 450 nm. Pengukuran harus dilakukan dalam waktu 15 menit setelah menambahkan solusi akhir.
Tindakan pencegahan:
1. Kit harus diseimbangkan pada suhu kamar selama 15-30 menit sebelum dikeluarkan dari lingkungan yang didinginkan. Jika pelat berlapis label enzim tidak dibuka, strip harus disimpan dalam kantong tertutup.
2. Kristal dapat diendapkan dalam cairan pencuci pekat, yang dapat dipanaskan dan dilarutkan dalam penangas air selama pengenceran, dan hasilnya tidak akan terpengaruh selama pencucian.
3. Sampler harus digunakan pada setiap langkah penambahan sampel, dan keakuratannya harus diperiksa secara teratur untuk menghindari kesalahan tes. Yang terbaik adalah mengontrol waktu pengambilan sampel dalam waktu 5 menit. Jika ada banyak spesimen, disarankan untuk menggunakan senjata voli untuk menambahkan sampel.
4. Harap buat kurva standar pada waktu yang sama dari setiap pengukuran, yang terbaik adalah membuat lubang ganda. Jika kandungan zat yang akan diuji dalam spesimen terlalu tinggi (nilai OD sampel lebih besar dari nilai OD sumur pertama dari sumur standar), harap encerkan dengan beberapa (n kali) dari tertentu sampel pengencer dan kemudian menentukannya. Multiple (× n × 5).
5. Film penyegelan terbatas pada penggunaan satu kali untuk menghindari kontaminasi silang.
6. Harap jauhkan substrat dari cahaya.
7. Dengan ketat ikuti instruksi, dan hasil tes harus ditentukan oleh pembaca mikro.
8. Semua sampel, cairan mencuci dan berbagai limbah harus diperlakukan sebagai agen infeksius.
9. Komponen berbagai batch reagen ini tidak boleh dicampur.
10. Jika ada perbedaan dengan manual bahasa Inggris, manual bahasa Inggris akan berlaku.
Perhitungan:
Mengambil konsentrasi standar sebagai absis dan nilai OD sebagai ordinat, menarik kurva standar pada kertas koordinat, dan menemukan konsentrasi yang sesuai dari kurva standar sesuai dengan nilai OD sampel; kemudian kalikan dengan faktor pengenceran; Hitung persamaan regresi linier dari kurva standar dengan nilai OD, ganti nilai OD sampel ke dalam persamaan, hitung konsentrasi sampel, dan kelipat dengan faktor pengenceran untuk mendapatkan konsentrasi aktual sampel.
(Gambar ini hanya untuk referensi)
Kinerja Kit:
1. Koefisien korelasi R antara regresi linier sampel dan konsentrasi yang diharapkan lebih dari 0,990.
2. Batch dan persetujuan masing -masing harus kurang dari 9% dan 11%
Rentang Pemeriksaan:
1pg / ml -45pg / ml
Kondisi penyimpanan dan periode validitas:
1. Simpan kit: 2-8 ℃.
2. Validitas: 6 bulan