Porcine β-human chorionic gonadotropin (β-HCG) enzyme-linked immunoassay kit Instruksi Manual Kit ini hanya untuk penggunaan penelitian.
Nama Narkoba:
Nama Generik: Porcine Beta Kit Gonadotropin Manusia (β-HCG) ELISA Kit
Tujuan Penggunaan:
Kit ini digunakan untuk penentuan β-manusia korionik gonadotropin (β-HCG) dalam serum babi, plasma dan sampel cairan terkait.
Prinsip Eksperimental:
Kit ini menggunakan metode sandwich antibodi ganda untuk menentukan tingkat gonadotropin korionik β-manusia babi (β-HCG) dalam spesimen. Pelat mikropora dilapisi dengan antibodi β-human chorionic gonadotropin (β-HCG) babi untuk membuat antibodi fase padat. Porcine β-human chorionic gonadotropin (β-HCG), kemudian dikombinasikan dengan antibodi gonadotropin β (β-HCG) villous hRP untuk membentuk kompleks antibodi berlabel antibodi-antigen-enzim, dan setelah pencucian substrat THE THEALM-enzim. ditambahkan untuk pengembangan warna. TMB dikonversi menjadi biru di bawah katalisis enzim HRP, dan menjadi kuning terakhir di bawah aksi asam. Kedalaman warna berkorelasi positif dengan gonadotropin β (β-HCG) manusia dalam sampel. Absorbansi (nilai OD) diukur dengan pembaca mikro pada panjang gelombang 450 nM, dan konsentrasi gonadotropin korionik β-manusia babi (β-HCG) dalam sampel dihitung oleh kurva standar.
Komposisi Kit:
1 20 kali larutan pencucian terkonsentrasi 30ml × 1 botol 7 stop larutan 6ml × 1 botol
2 Enzim Label Reagen 6ml × 1 Botol 8 Standar (270μg / L) Botol 0,5ml × 1
3 Label Label Label Label 12 Sumur × 8 Strip 9 Pengenceran Standar 1,5ml × 1 Botol
4 Contoh pengencer 6ml × 1 botol 10 instruksi 1 salinan
5 Pengembang A Solution 6ml × 1 Bottle 11 2 Sealing Film
6 Pengembang B Cairan 6ml × 1 / Botol 12 Tas Tertutup 1
Persyaratan Spesimen:
1. Spesimen diekstraksi sesegera mungkin setelah pengumpulan, dan ekstraksi dilakukan sesuai dengan literatur yang relevan, dan percobaan harus dilakukan sesegera mungkin setelah ekstraksi. Jika tes tidak dapat dilakukan segera, spesimen dapat disimpan pada -20 ℃, tetapi pembekuan dan pencairan berulang harus dihindari
2. Sampel yang mengandung NAN3 tidak dapat dideteksi karena NAN3 menghambat aktivitas peroksidase lobak (HRP).
Langkah:
1. Pengenceran dan pemuatan produk standar: Tetapkan 10 sumur standar pada pelat berlapis enzim, tambahkan 100 μl produk standar di sumur pertama dan kedua, dan kemudian tambahkan produk standar di sumur pertama dan kedua. 50μl pengencer, aduk rata; Kemudian ambil 100μL dari sumur pertama dan sumur kedua dan tambahkan mereka ke sumur ketiga dan keempat masing -masing, dan kemudian tambahkan 50μl larutan pengenceran standar masing -masing ke sumur ketiga dan keempat, aduk dengan baik kemudian ambil masing -masing 50μL di sumur ketiga dan keempat dan membuangnya, kemudian tambahkan 50μL masing -masing ke sumur kelima dan keenam, dan kemudian tambahkan 50UL dari solusi pengenceran standar masing -masing ke sumur kelima dan keenam, dan aduk rata; Setelah dicampur, ambil 50μL dari sumur kelima dan keenam dan tambahkan masing -masing ke sumur ketujuh dan kedelapan. Kemudian tambahkan 50μl larutan pengenceran standar masing -masing ke sumur ketujuh dan kedelapan. Ambil 50μL dari delapan sumur dan tambahkan ke sumur kesembilan dan kesepuluh. Kemudian tambahkan 50μl larutan pengenceran standar masing -masing ke sumur kesembilan dan kesepuluh. Setelah dicampur, ambil 50μL dari sumur kesembilan dan kesepuluh dan buang. (Setelah pengenceran, volume masing -masing sumur adalah 50μL, dan konsentrasi adalah 180μg / L, 120μg / L, 60μg / L, 30μg / L, 15μg / L).
2. Tambahkan sampel: Mengatur sumur kosong (sumur kontrol kosong tidak menambahkan sampel dan reagen enzim, sisa langkahnya sama) dan sumur sampel yang akan diuji. Tambahkan 40μl pengencer sampel ke sumur sampel uji dari pelat yang dilapisi enzim, dan kemudian tambahkan 10μl sampel uji (pengenceran akhir sampel adalah 5 kali). Tambahkan sampel dan tambahkan sampel ke bagian bawah sumur mikro, cobalah untuk tidak menyentuh dinding sumur, kocok perlahan untuk dicampur.
3. Inkubasi: Tutup pelat dengan film penyegelan dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 30 menit.
4. Larutan pencampuran: encerkan 20 kali cairan pencucian terkonsentrasi dengan air suling 20 kali dan cadangan
5. Cuci: Kupas dengan hati -hati dari film penyegelan, buang cairan, putar kering, isi masing -masing sumur dengan solusi pencucian, diamkan selama 30 detik dan buang, ulangi 5 kali dan keringkan.
6. Tambahkan enzim: Tambahkan 50μl reagen label enzim ke masing -masing sumur, kecuali kosong dengan sumur.
7. Inkubasi: Operasi sama dengan 3.
8. Cuci: Operasi sama dengan 5.
9. Pengembangan Warna: Tambahkan 50μl pengembang A ke masing -masing sumur, dan kemudian tambahkan 50μl pengembang B, aduk perlahan, dan kembangkan warna pada 37 ℃ dalam gelap
15 menit.
10. Pengakhiran: Tambahkan 50μl larutan berhenti ke setiap sumur untuk menghentikan reaksi (saat ini biru akan berubah menjadi kuning).
11. Penentuan: Ukur absorbansi (nilai OD) dari masing -masing sumur secara berurutan dengan AC kosong pada nol dan panjang gelombang 450 nm. Pengukuran harus dilakukan dalam waktu 15 menit setelah menambahkan solusi berhenti.
Perhitungan:
Mengambil konsentrasi standar sebagai absis dan nilai OD sebagai ordinat, menarik kurva standar pada kertas koordinat, dan menemukan konsentrasi yang sesuai dari kurva standar sesuai dengan nilai OD sampel; kalikan dengan faktor pengenceran; atau gunakan konsentrasi standar menghitung persamaan regresi linier dari kurva standar dengan nilai OD, mengganti nilai OD sampel ke dalam persamaan, menghitung konsentrasi sampel, dan melipatgandakannya dengan faktor pengenceran untuk mendapatkan konsentrasi aktual dari contoh.
Tindakan pencegahan:
1. Kit harus dikeluarkan dari lingkungan yang didinginkan dan diseimbangkan pada suhu kamar selama 15-30 menit sebelum digunakan. Jika pelat berlapis enzim tidak disegel setelah membuka, strip harus disimpan dalam kantong tertutup.
2. Kristal dapat diendapkan dalam cairan pencuci pekat, yang dapat dipanaskan dan dilarutkan dalam penangas air selama pengenceran, dan hasilnya tidak akan terpengaruh selama pencucian.
3. Sampler harus digunakan pada setiap langkah penambahan sampel, dan keakuratannya harus diperiksa secara teratur untuk menghindari kesalahan tes. Yang terbaik adalah mengontrol waktu pengambilan sampel dalam waktu 5 menit. Jika ada banyak spesimen, disarankan untuk menggunakan senjata voli untuk menambahkan sampel.
4. Harap buat kurva standar pada waktu yang sama dari setiap pengukuran, yang terbaik adalah membuat lubang ganda. Jika kandungan zat yang akan diuji dalam spesimen terlalu tinggi (nilai OD sampel lebih besar dari nilai OD sumur pertama dari sumur standar), harap encerkan dengan beberapa (n kali) dari tertentu sampel pengencer dan kemudian menentukannya. Multiple (× n × 5).
5. Film penyegelan terbatas pada penggunaan satu kali untuk menghindari kontaminasi silang.
6. Harap jauhkan substrat dari cahaya.
7. Dengan ketat ikuti instruksi, dan hasil tes harus ditentukan oleh pembaca mikro.
8. Semua sampel, cairan mencuci dan berbagai limbah harus diperlakukan sebagai agen infeksius.
9. Komponen berbagai batch reagen ini tidak boleh dicampur.
10. Jika ada perbedaan dengan manual bahasa Inggris, manual bahasa Inggris akan berlaku.
Rentang Pemeriksaan:
10μg / L -200μg / L
spesifikasi:
96 Sajian / Kondisi Penyimpanan Kotak dan Tanggal Kedaluwarsa
1. Penyimpanan Kit :; 2-8 ℃.
2. Validitas: 6 bulan