Gonadotropina corionica β-umana suina (β-HCG) Manuale di istruzioni immunologiche legate all'enzima, questo kit questo kit è solo per uso di ricerca.
Nome del farmaco:
Nome generico: beta suino beta umano gonadotropina (β-HCG) kit ELISA
Scopo dell'uso:
Questo kit viene utilizzato per la determinazione della gonadotropina corionica β-umana (β-HCG) nel siero di maiale, nel plasma e nei relativi campioni liquidi.
Principio sperimentale:
Questo kit utilizza il metodo sandwich a doppio anticorpo per determinare il livello di gonadotropina corionica β-umana suina (β-HCG) nel campione. Le piastre microporose sono state rivestite con anticorpi corionici di gonadotropina corionica β-umana in suino (β-HCG) per produrre anticorpi in fase solida. Gonadotropina corionica β-umana porcina (β-HCG), quindi combinata con la gonadotropina villo umana marcata con HRP e dopo il lavaggio di un lavaggio anticorpo anticorpo-antigene-antigene-antigene-antigene-entigen Aggiunto per lo sviluppo del colore. TMB viene convertito in blu sotto la catalisi dell'enzima HRP e nel giallo finale sotto l'azione dell'acido. La profondità del colore è positivamente correlata con la gonadotropina villo umana β (β-HCG) nel campione. L'assorbanza (valore OD) è stata misurata con un lettore di micropiastre a una lunghezza d'onda di 450 nM e la concentrazione di gonadotropina corionica β-umana suina (β-HCG) nel campione è stata calcolata da una curva standard.
Composizione del kit:
1 20 volte la soluzione di lavaggio concentrata 30 ml × 1 bottiglia 7 Soluzione di arresto 6 ml × 1 bottiglia
Reagente dell'etichetta enzimatica 6 ml × 1 bottiglia 8 standard (270μg / L) 0,5 ml × 1 bottiglia
3 pozzi rivestiti con etichetta enzimatica 12 Wells × 8 strisce 9 diluizioni standard 1,5 ml × 1 bottiglia
4 diluente campione 6 ml × 1 bottiglia 10 istruzioni 1 copia
5 sviluppatore Una soluzione 6 ml × 1 bottiglia 11 2 pellicola di tenuta
6 sviluppatore B liquido 6 ml × 1 / bottiglia 12 sacchetto sigillato 1
Requisiti del campione:
1. I campioni vengono estratti il prima possibile dopo la raccolta e l'estrazione viene eseguita in base alla letteratura pertinente e gli esperimenti dovrebbero essere condotti il prima possibile dopo l'estrazione. Se il test non può essere eseguito immediatamente, il campione può essere conservato a -20 ℃, ma il congelamento e lo scongelamento ripetuti dovrebbero essere evitati
2. I campioni contenenti NAN3 non possono essere rilevati perché la NAN3 inibisce l'attività della perossidasi di rafano (HRP).
Passaggi:
1. diluizione e carico di prodotti standard: impostare 10 pozzi standard sulla piastra rivestita di enzimi, aggiungere 100 μL dei prodotti standard nel primo e secondo pozzi, quindi aggiungi i prodotti standard nel primo e nel secondo pozzetto. 50 μl di diluente, mescolare bene; Quindi prendere 100 μl dal primo pozzo e il secondo e aggiungerli rispettivamente al terzo e quarto pozzo, quindi aggiungi 50 μl di soluzione di diluizione standard rispettivamente al terzo e quarto pozzo, mescola bene, quindi prendi 50 μl ciascuno nel terzo e quarto pozzi e scartalo, quindi aggiungi 50 μl ciascuno al quinto e sesto pozzi, quindi aggiungi 50ul della soluzione di diluizione standard rispettivamente al quinto e sesto pozzi e mescola bene; Dopo la miscelazione, prendi 50 μl dal quinto e sesto pozzi e aggiungili rispettivamente al settimo e all'ottavo pozzi. Quindi aggiungere 50 μl di soluzione di diluizione standard rispettivamente al settimo e all'ottavo pozzi. Prendi 50 μl dagli otto pozzi e aggiungili al nono e al decimo pozzi. Quindi aggiungere 50 μl della soluzione di diluizione standard rispettivamente al nono e ai decimi pozzi. Dopo la miscelazione, prendi 50 μl dal nono e decimo pozzi e scarta. (Dopo diluizione, il volume di ciascun pozzetto è 50 μl e le concentrazioni sono 180 μg / L, 120μg / L, 60μg / L, 30μg / L, 15 μg / L).
2. Aggiungi campioni: impostare pozzi vuoti (i pozzi di controllo vuoti non aggiungono campioni e reagenti enzimatici, il resto dei passaggi sono uguali) e i pozzi di campionamento da testare. Aggiungi 40 μL di diluente del campione al pozzo del campione di prova della piastra rivestita di enzimi, quindi aggiungi 10 μl del campione di prova (la diluizione finale del campione è 5 volte). Aggiungi il campione e aggiungi il campione nella parte inferiore del pozzo del micropiastra, cerca di non toccare il muro del pozzo, agitare delicatamente per mescolare.
3. Incubazione: sigillare la piastra con la pellicola di tenuta e incubare a 37 ° C per 30 minuti.
4. Soluzione di miscelazione: diluire 20 volte il liquido di lavaggio concentrato con acqua distillata 20 volte e riservare
5. Lavaggio: staccare con cura la pellicola di tenuta, scartare il liquido, asciugare, riempire ogni pozzo con la soluzione di lavaggio, lasciarlo stare per 30 secondi e scartare, ripetere 5 volte e asciugare.
6. Aggiungi enzima: aggiungi 50 μl di reagente dell'etichetta enzimatica a ciascun pozzetto, tranne che in bianco.
7. Incubazione: l'operazione è uguale a 3.
8. Lavaggio: l'operazione è uguale a 5.
9. Sviluppo del colore: aggiungi 50 μl di sviluppatore A a ciascun pozzetto, quindi aggiungi 50 μl di sviluppatore B, mescola delicatamente e sviluppa il colore a 37 ℃ al buio
15 minuti.
10. Terminatura: aggiungere 50 μl di soluzione di arresto a ciascun pozzetto per fermare la reazione (in questo momento il blu si rivolgerà al giallo).
11. Determinazione: misurare l'assorbanza (valore OD) di ciascun pozzetto in sequenza con il condizionatore d'aria vuoto a zero e lunghezza d'onda di 450 nm. La misurazione deve essere eseguita entro 15 minuti dall'aggiunta della soluzione di arresto.
Calcolo:
Prendendo la concentrazione dello standard come ascissa e valore OD come ordinata, disegnare una curva standard sulla carta di coordinate e trova la concentrazione corrispondente dalla curva standard in base al valore OD del campione; moltiplicare per il fattore di diluizione; o utilizzare la concentrazione dello standard calcola l'equazione di regressione lineare della curva standard con il valore OD, sostituire il valore OD del campione nell'equazione, calcolare la concentrazione del campione e moltiplicarlo per il fattore di diluizione per ottenere la concentrazione effettiva di il campione.
Precauzioni:
1. Il kit deve essere tolto dall'ambiente refrigerato ed equilibrato a temperatura ambiente per 15-30 minuti prima dell'uso. Se la piastra rivestita di enzimi è non salvata dopo l'apertura, la striscia deve essere immagazzinata in un sacchetto sigillato.
2. I cristalli possono essere precipitati nel liquido di lavaggio concentrato, che può essere riscaldato e sciolto in un bagno d'acqua durante la diluizione e i risultati non saranno influenzati durante il lavaggio.
3. Il campionatore deve essere utilizzato ad ogni fase dell'aggiunta del campione e l'accuratezza deve essere regolarmente verificata per evitare errori di prova. È meglio controllare il tempo di campionamento entro 5 minuti. Se ci sono molti esemplari, si consiglia di utilizzare una pistola per il tiro al volo per aggiungere campioni.
4. Si prega di creare una curva standard contemporaneamente a ciascuna misurazione, è meglio creare un doppio foro. Se il contenuto della sostanza da testare nel campione è troppo elevato (il valore OD del campione è maggiore del valore OD del primo pozzo del pozzetto standard), si prega di diluirlo con un determinato multiplo (n volte) il diluente del campione e quindi determinarlo. Multiplo (× n × 5).
5. Il film di tenuta è limitato all'uso una tantum per evitare la contaminazione incrociata.
6. Tenere il substrato lontano dalla luce.
7. Seguire rigorosamente le istruzioni e i risultati del test devono essere determinati dal lettore di micropiastre.
8. Tutti i campioni, il lavaggio di liquidi e vari rifiuti dovrebbero essere trattati come agenti infettivi.
9. I componenti di diversi lotti di questo reagente non devono essere miscelati.
10. Se c'è qualche differenza con il manuale inglese, prevarrà il manuale inglese.
intervallo di esame:
10μg / L -200μg / L
Specifica:
96 Presenze / Condizioni di archiviazione della scatola e data di scadenza
1. Storage kit :; 2-8 ℃.
2. Validità: 6 mesi