ヒト抗HCG抗体IgA（HCG-IGA）ELISA
この試薬を使用するためのキットの指示は、研究のみを使用するためのものです
目的：このキットは、ヒト血清、血漿、および関連する液体サンプルにおける抗HCG抗体IgA（HCG-IGA）の含有量を決定するために使用されます。
実験原則：
このキットは、二重抗体サンドイッチ法を使用して、標本のヒト抗HCG抗体IgA（HCG-IGA）のレベルを決定します。微孔性プレートを精製したヒト抗HCG抗体IgA（HCG-IGA）抗体でコーティングして、固相抗体を調製しました。抗HCG抗体IgA（HCG-IGA）をmAbでコーティングしたマイクロウェルに添加し、HRPで標識してヤギ抗ヒト抗体が結合して抗体抗酵素標識抗体複合体を形成しました。徹底的な洗浄後、色の発達のために基板TMBが追加されます。 TMBは、HRP酵素の触媒下で青に変換され、酸の作用下で最終黄色に変換されます。色の深さは、サンプルの抗HCG抗体IgA（HCG-IGA）と正の相関があります。吸光度（OD値）は、波長450 nmのマイクロプレートリーダーで測定され、サンプル中のヒト抗HCG抗体IgA（HCG-IGA）の濃度は標準曲線によって計算されました。
キット構成：
キット構成48ウェル構成96ウェル構成ストレージ手順1パート1パーツシーリングプレートフィルム2個（48）2個（96）
1つの密閉袋と1つの酵素標識コーティングプレート1×48 1×96 2-8℃保持標準：54pg / ml 0.5ml×1ボトル0.5ml×1保存標準希釈剤1.5ml ML×1酵素標識試薬のボトル2-8℃で保存されている2-8 ml×1ボトルのサンプル希釈液の6 ml×1ボトル2-8℃3 ml×1ボトルの6 ml×1ボトルのカラーストレージのボトルの2-8ボトル3 ml×1ボトル-8℃溶液A溶液3 ml×1ボトル6 ml×1ボトル2-8°Cストレージ開発者Bソリューション3 ml×1ボトル6 ml×1ボトル2-8°C保管停止ソリューション3ml×1ボトル6ml×1ボトル2-濃縮洗浄溶液を8℃（20ml×20回）×1ボトル（20ml×30回）×1ボトルで2-8で保管します。
1.血清：室温の血液は10〜20分間自然に凝固し、約20分間（2000-3000 rpm）遠心分離します。貯蔵中に沈殿物が現れる場合は、上清を注意深く集め、再び遠心分離します。
2.プラズマ：EDTAまたはクエン酸ナトリウムは、標本の要件に従って抗凝固剤として選択し、10〜20分間混合し、約20分間（2000-3000 rpm）遠心分離します。上清を注意深く集めます。保管中に沈殿物が形成される場合、再び遠心分離する必要があります。
3.尿：滅菌チューブに収集され、約20分間遠心分離されています（2000-3000 rpm）。上清を注意深く集めます。保管中に沈殿物が形成される場合は、再び遠心分離します。胸膜および腹水、脳脊髄液の参照実装。
4.細胞培養上清：分泌された成分を検出するときは、滅菌チューブで収集します。約20分間（2000-3000 rpm）遠心。上清を注意深く集めます。細胞内の成分を検出する場合、細胞懸濁液をPBS（pH7.2-7.4）で希釈すると、細胞濃度は約100万 / mlに達します。繰り返しの凍結と解凍により、細胞が破壊され、細胞内成分が放出されます。約20分間（2000-3000 rpm）遠心。上清を注意深く集めます。保管中に沈殿物が形成される場合、再び遠心分離する必要があります。
5.標本を整理する：標本を切った後、重量を量ります。一定量のPBS、ph7.4を追加します。後で使用するために、液体窒素ですばやく凍結して保存します。標本が溶けた後、2〜8°Cの温度を維持します。一定量のPBS（pH7.4）を加え、マニュアルまたはホモジナイザーで標本を均質化します。約20分間（2000-3000 rpm）遠心。上清を注意深く集めます。アリコート後、一部はテストされ、残りは将来の使用のために凍結されます。
6.標本は、収集後できるだけ早く抽出する必要があります。抽出は、関連する文献に従って実行する必要があります。実験は、抽出後できるだけ早く実行する必要があります。テストをすぐに実行できない場合は、試料を-20℃で保存できますが、繰り返し凍結と解凍は避ける必要があります。
7. NAN3が西洋ワラディッシュペルオキシダーゼ（HRP）の活性を阻害するため、NAN3を含むサンプルを検出できません。
ステップ：
1.標準製品の希釈と負荷：酵素でコーティングされたプレートに10個の標準ウェルを設定し、1枚目と2番目のウェルに100μlの標準製品を追加し、1枚目と2番目のウェルに標準製品を追加します。 50μlの希釈剤、よく混ぜます。次に、最初のウェルと2番目のウェルから100μlを摂取し、それぞれ3番目と4番目のウェルに加え、それぞれ3番目と4番目のウェルに50μlの標準希釈溶液を追加し、3番目と4番目のウェルでそれぞれ50μlを摂取しますそれを捨ててから、それぞれ50μlを5番目と6番目のウェルに加え、それぞれ5番目と6番目のウェルに標準希釈溶液をそれぞれ追加し、ウェルを混ぜます。混合した後、5番目と6番目の井戸から50μlを摂取し、それぞれ7番目と8番目の井戸に加えます。次に、50μlの標準希釈溶液をそれぞれ7番目と8番目のウェルに加えます。 8つの井戸から50μLを取り、9番目と10番目の井戸に追加します。次に、それぞれ50μlの標準希釈溶液を9番目と10番目のウェルに加えます。混合した後、9番目と10番目のウェルから50μLを取り、廃棄します。 （希釈後、各ウェルの体積は50μlで、濃度は36pg / ml、24pg / ml、12pg / ml、6pg / ml、3pg / mlです）。
2.サンプルの追加：空白の井戸をセットアップします（空白のコントロールウェルはサンプルや酵素試薬を追加せず、残りのステップは同じです）とテストするサンプルウェル。酵素でコーティングされたプレートのテストサンプルウェルにサンプル希釈液を40μLし、10μLのテストサンプルを加えます（サンプルの最終希釈は5回です）。サンプルを追加して、マイクロプレートの井戸の底にサンプルを追加し、井戸の壁に触れないようにして、そっと振ります。
3.インキュベーション：プレートをシーリングフィルムで密封し、37°Cで30分間インキュベートします。
4.混合溶液：30回（48Tの20回）濃縮洗浄液で蒸留水で30回（48Tの20回）希釈してから使用します。
5.洗浄：シーリングフィルムを慎重に剥がし、液体を廃棄し、ドライを回転させ、洗濯溶液を十分に満たし、30秒間放置し、廃棄し、5回繰り返して乾燥させます。
6.酵素を追加：空白の井戸を除き、各ウェルに50μlの酵素標識試薬を追加します。
7.インキュベーション：操作は3と同じです。
8.洗浄：操作は5と同じです。
9.カラー開発：50μlの開発者Aを各ウェルに追加し、50μlの開発者Bを加え、穏やかに混ぜ、37℃で15分間暗闇で表示します。
10.終了：各ウェルに50μlの停止溶液を追加して反応を停止します（この時点で青は黄色に変わります）。
11.決定：ゼロおよび450 nmの波長の空白のエアコンを使用して、各ウェルの吸光度（OD値）を順番に測定します。測定は、最終的なソリューションを追加してから15分以内に実行する必要があります。
予防：
1.冷蔵環境から取り出される前に、キットは室温で15〜30分間平衡化する必要があります。酵素ラベルでコーティングされたプレートが開かれていない場合、ストリップは密閉袋に保管する必要があります。
2.結晶は濃縮洗浄液で沈殿する可能性があります。濃縮洗浄液は、希釈中に加熱して水浴に溶解することができ、洗浄中に結果は影響を受けません。
3.サンプラーをサンプルの追加の各ステップで使用する必要があります。また、テストエラーを避けるために精度を定期的にチェックする必要があります。サンプリング時間を5分以内に制御するのが最善です。多くの標本がある場合は、サンプルを追加するためにボレーガンを使用することをお勧めします。
4.各測定と同時に標準曲線を作成してください。二重穴を作るのが最善です。試料でテストする物質の含有量が高すぎる場合（サンプルのOD値は標準ウェルの最初のウェルのOD値よりも大きい場合）サンプルが希釈し、それを決定します。複数（×n×5）。
5.シーリングフィルムは、相互汚染を避けるために1回の使用に限定されています。
6.基板を光から遠ざけてください。
7.指示に厳密に従うと、テスト結果はマイクロプレートリーダーによって決定される必要があります。
8.すべてのサンプル、洗浄液、およびさまざまな廃棄物は、感染剤として扱う必要があります。
9.この試薬のさまざまなバッチのコンポーネントを混合してはなりません。
10.英語のマニュアルに違いがある場合、英語のマニュアルが勝ちます。
計算：
標準の濃度をAbscissaとして、OD値を縦座標として取得し、座標用紙に標準曲線を描き、サンプルのOD値に従って標準曲線からの対応する濃度を見つけます。次に、希釈係数を掛けます。標準曲線の線形回帰方程式をOD値で計算し、サンプルのOD値を方程式に置き換え、サンプル濃度を計算し、希釈係数を掛けてサンプルの実際の濃度を取得します。
（この写真は参照用のみです）
キットのパフォーマンス：
1.サンプルの線形回帰と予想される濃度の間の相関係数rは0.990を超えています。
2.バッチと承認はそれぞれ9％と11％未満でなければなりません
試験範囲：
1pg / ml -45pg / ml
保管条件と妥当性期間：
1.キットを保存：2-8℃。
2.妥当性：6か月