Antibodi anti-HCG manusia IGA (HCG-IGA) ELISA
Arahan kit untuk menggunakan reagen ini adalah untuk kegunaan penyelidikan sahaja
Tujuan: Kit ini digunakan untuk menentukan kandungan antibodi anti-HCG IGA (HCG-IGA) dalam serum manusia, plasma dan sampel cecair yang berkaitan.
Prinsip Eksperimen:
Kit ini menggunakan kaedah sandwic antibodi ganda untuk menentukan tahap antibodi anti-HCG manusia IGA (HCG-IGA) dalam spesimen. Plat microporous disalut dengan antibodi antibodi anti-HCG manusia (HCG-IGA) yang disucikan untuk menyediakan antibodi fasa pepejal. Anti-HCG antibodi IGA (HCG-IGA) telah ditambah kepada microwells yang disalut dengan mAb pada gilirannya, dan kemudian dilabelkan dengan HRP antibodi anti-manusia kambing mengikat untuk membentuk kompleks antibodi antibodi-antigen-enzim. Selepas mencuci menyeluruh, substrat TMB ditambah untuk pembangunan warna. TMB ditukar menjadi biru di bawah pemangkinan enzim HRP, dan menjadi kuning terakhir di bawah tindakan asid. Kedalaman warna berkorelasi positif dengan antibodi anti-HCG IGA (HCG-IGA) dalam sampel. Penyerapan (nilai OD) diukur dengan pembaca mikroplat pada panjang gelombang 450 nM, dan kepekatan antibodi anti-HCG manusia IGA (HCG-IGA) dalam sampel dikira oleh lengkung standard.
Komposisi Kit:
KOMPOSISI KIT 48 Konfigurasi Baik 96 Arahan Penyimpanan Konfigurasi Baik 1 Bahagian 1 Bahagian Pengedap Plate Filem 2 keping (48) 2 keping (96)
Satu beg tertutup dan satu plat salutan berlabel enzim 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃ Standard yang dipelihara: 54pg / ml 0.5ml × 1 botol 0.5ml × 1 dipelihara standard 1.5ml × 2-8 ℃ × 1 botol 1.5 ML × 1 botol reagen berlabel enzim yang disimpan pada 2-8 ℃ 3 ml × 1 botol 6 ml × 1 botol pencairkan sampel pada 2-8 ℃ 3 ml × 1 botol 6 ml × 1 botol penyimpanan warna pada 2 pada 2 -8 ℃ Reagen larutan 3 ml × 1 botol 6 ml × 1 botol 2-8 ° C Penyimpanan Penyimpanan B Penyelesaian 3 ml × 1 botol 6 ml × 1 botol 2-8 ° C Penyimpanan Stop Solution 3ml × 1 botol 6ml × 1 Botol 2- Simpan penyelesaian basuh pekat pada 8 ℃ (20ml × 20 kali) × 1 botol (20ml × 30 kali) × 1 botol pada 2-8 ℃
1. Serum: Suhu Bilik Bilik Koagulasi secara semulajadi selama 10-20 minit, disentrifugasi selama kira-kira 20 minit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan berhati -hati dan centrifuge sekali lagi jika mendakan muncul semasa penyimpanan.
2. Plasma: EDTA atau natrium sitrat harus dipilih sebagai antikoagulan mengikut keperluan spesimen, dicampur selama 10-20 minit, dan disentrifugasi selama kira-kira 20 minit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan berhati -hati. Sekiranya bentuk mendakan semasa penyimpanan, ia harus disentrifugasi lagi.
3. Urin: Dikumpulkan dalam tiub steril dan disentrifugasi selama kira-kira 20 minit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan berhati -hati. Sekiranya bentuk mendakan semasa penyimpanan, centrifuge lagi. Pleural dan ascites, pelaksanaan rujukan cecair serebrospinal.
4. Supernatant kultur sel: Apabila mengesan komponen yang dirembes, kumpulkan dengan tiub steril. Centrifuge selama kira-kira 20 minit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan berhati -hati. Apabila mengesan komponen di dalam sel, cairkan penggantungan sel dengan PBS (pH7.2-7.4), dan kepekatan sel akan mencapai kira-kira 1 juta / ml. Melalui pembekuan dan pencairan berulang, sel -sel dimusnahkan dan komponen intrasel dilepaskan. Centrifuge selama kira-kira 20 minit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan berhati -hati. Sekiranya bentuk mendakan semasa penyimpanan, ia harus disentrifugasi lagi.
5. Susun spesimen: Selepas memotong spesimen, timbangkannya. Tambah sejumlah PBS, Ph7.4. Cepat membekukan dan simpan dengan nitrogen cecair untuk kegunaan kemudian. Selepas spesimen cair, ia masih mengekalkan suhu 2-8 ° C. Tambah sejumlah PBS (pH7.4) dan homogenisasi spesimen dengan manual atau homogenizer. Centrifuge selama kira-kira 20 minit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan berhati -hati. Selepas aliquoting, bahagian akan diuji, dan selebihnya dibekukan untuk kegunaan masa depan.
6. Spesimen harus diekstrak secepat mungkin selepas pengumpulan. Pengekstrakan harus dijalankan mengikut kesusasteraan yang relevan. Eksperimen harus dijalankan secepat mungkin selepas pengekstrakan. Sekiranya ujian tidak dapat dilakukan dengan serta -merta, spesimen boleh disimpan pada -20 ℃, tetapi pembekuan dan pencairan berulang harus dielakkan.
7. Sampel yang mengandungi NAN3 tidak dapat dikesan kerana NAN3 menghalang aktiviti peroksidase lobak (HRP).
Langkah-langkah:
1. Pencairan dan pemuatan produk standard: Tetapkan 10 sumur standard pada plat bersalut enzim, tambah 100 μl produk standard dalam telaga pertama dan kedua, dan kemudian tambahkan produk standard di telaga pertama dan kedua. 50μl pencair, campurkan dengan baik; Kemudian ambil 100μl dari sumur pertama dan kedua sumur dan tambahkannya ke telaga ketiga dan keempat masing -masing, dan kemudian tambahkan 50μl penyelesaian pencairan standard ke telaga ketiga dan keempat masing -masing, campurkan dengan baik kemudian ambil 50μl setiap satu di telaga ketiga dan keempat dan buangnya, kemudian tambahkan 50μl setiap satu ke telaga kelima dan keenam, dan kemudian tambah 50ul penyelesaian pencairan standard kepada telaga kelima dan keenam masing -masing, dan campurkan dengan baik; Selepas mencampurkan, ambil 50μL dari telaga kelima dan keenam dan tambahkannya ke telaga ketujuh dan kelapan masing -masing. Kemudian tambah 50μl penyelesaian pencairan standard ke telaga ketujuh dan kelapan masing -masing. Ambil 50μl dari lapan telaga dan tambahkannya ke telaga kesembilan dan kesepuluh. Kemudian tambahkan 50μl penyelesaian pencairan standard kepada telaga kesembilan dan kesepuluh masing -masing. Selepas mencampurkan, ambil 50μl dari telaga kesembilan dan kesepuluh dan buang. (Selepas pencairan, jumlah setiap sumur adalah 50μl, dan kepekatannya ialah 36pg / ml, 24pg / ml, 12pg / ml, 6pg / ml, 3pg / ml).
2. Tambah sampel: Sediakan telaga kosong (telaga kawalan kosong tidak menambah sampel dan reagen enzim, selebihnya langkah -langkah yang sama) dan telaga sampel yang akan diuji. Tambah 40μl sampel pencair ke sampel ujian telaga plat bersalut enzim, dan kemudian tambah 10μL sampel ujian (pencairan akhir sampel adalah 5 kali). Tambah sampel dan tambahkan sampel ke bahagian bawah telaga mikroplat, cuba jangan menyentuh dinding telaga, goncang perlahan -lahan untuk dicampur.
3. Inkubasi: Tutup plat dengan filem pengedap dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 30 minit.
4. Penyelesaian pencampuran: Cairkan 30 kali (20 kali 48T) cecair mencuci pekat dengan air suling 30 kali (20 kali 48T) dan kemudian gunakan.
5. Mencuci: Berhati -hati mengupas filem pengedap, buang cecair, spin kering, isi setiap sumur dengan penyelesaian basuh, biarkan ia berdiri selama 30 saat dan buang, ulangi 5 kali dan pat kering.
6. Tambah enzim: Tambah 50μl reagen label enzim ke setiap sumur, kecuali kosong.
7. Inkubasi: Operasi adalah sama dengan 3.
8. Mencuci: Operasi adalah sama dengan 5.
9. Pembangunan Warna: Tambah 50μl pemaju A ke setiap sumur, dan kemudian tambah 50μl pemaju B, campurkan perlahan -lahan, dan paparkan pada 37 ℃ selama 15 minit dalam kegelapan.
10. Penamatan: Tambah 50μl penyelesaian berhenti untuk setiap telaga untuk menghentikan reaksi (pada masa ini biru akan beralih kepada kuning).
11. Penentuan: Ukur penyerapan (nilai OD) setiap sumur dalam urutan dengan penghawa dingin kosong pada sifar dan panjang gelombang 450 nm. Pengukuran perlu dilakukan dalam masa 15 minit selepas menambah penyelesaian akhir.
Langkah berjaga-berjaga:
1. Kit harus diselaraskan pada suhu bilik selama 15-30 minit sebelum diambil dari persekitaran yang disejukkan. Sekiranya plat bersalut label enzim tidak dibuka, jalur harus disimpan dalam beg yang dimeteraikan.
2. Kristal boleh dicetuskan dalam cecair basuh pekat, yang boleh dipanaskan dan dibubarkan dalam mandi air semasa pencairan, dan hasilnya tidak akan terjejas semasa mencuci.
3. Sampler hendaklah digunakan pada setiap langkah tambahan sampel, dan ketepatannya harus diperiksa secara teratur untuk mengelakkan kesilapan ujian. Adalah lebih baik untuk mengawal masa pensampelan dalam masa 5 minit. Sekiranya terdapat banyak spesimen, disarankan untuk menggunakan pistol voli untuk menambah sampel.
4. Sila buat lengkung standard pada masa yang sama setiap pengukuran, sebaiknya membuat lubang ganda. Jika kandungan bahan yang akan diuji dalam spesimen terlalu tinggi (nilai OD sampel lebih besar daripada nilai OD dari sumur pertama yang baik), sila cairkannya dengan beberapa (n kali) tertentu pencair sampel dan kemudian menentukannya. Pelbagai (× N × 5).
5. Filem pengedap adalah terhad kepada penggunaan sekali untuk mengelakkan pencemaran silang.
6. Sila simpan substrat dari cahaya.
7. Ketat ikut arahan, dan keputusan ujian mesti ditentukan oleh pembaca mikroplate.
8. Semua sampel, mencuci cecair dan pelbagai sisa harus dianggap sebagai agen berjangkit.
9. Komponen kumpulan yang berlainan reagen ini tidak boleh dicampur.
10. Jika terdapat perbezaan dengan Manual Bahasa Inggeris, Manual Bahasa Inggeris akan diguna pakai.
Pengiraan:
Mengambil kepekatan standard sebagai abscissa dan nilai OD sebagai ordinat, lukis lengkung standard pada kertas koordinat, dan cari kepekatan yang sepadan dari lengkung standard mengikut nilai OD sampel; kemudian darab dengan faktor pencairan; Kirakan persamaan regresi linear lengkung standard dengan nilai OD, gantikan nilai OD sampel ke dalam persamaan, hitung kepekatan sampel, dan kalikan dengan faktor pencairan untuk mendapatkan kepekatan sebenar sampel.
(Gambar ini hanya untuk rujukan)
Prestasi Kit:
1. Koefisien korelasi R antara regresi linear sampel dan kepekatan yang dijangkakan adalah lebih daripada 0.990.
2. Kumpulan dan kelulusan hendaklah kurang daripada 9% dan 11% masing -masing
Julat Peperiksaan:
1pg / ml -45pg / ml
Syarat Penyimpanan dan Tempoh Kesahan:
1. Simpan kit: 2-8 ℃.
2. Kesahan: 6 bulan