Porcine β-manusia chorionic gonadotropin (β-HCG) Manual arahan kit immunoassay kit enzim kit ini hanya untuk kegunaan penyelidikan sahaja.
Nama Dadah:
Nama Generik: Porcine Beta Manusia Chorionic Gonadotropin (β-HCG) Kit ELISA
Tujuan Penggunaan:
Kit ini digunakan untuk penentuan β-manusia chorionic gonadotropin (β-HCG) dalam serum babi, plasma dan sampel cecair yang berkaitan.
Prinsip Eksperimen:
Kit ini menggunakan kaedah sandwic antibodi ganda untuk menentukan tahap porcine β-manusia chorionic gonadotropin (β-HCG) dalam spesimen. Plat microporous disalut dengan antibodi gonadotropin (β-HCG) porcine porcine porcine untuk membuat antibodi fasa pepejal. Porcine β-manusia chorionic gonadotropin (β-hCG), kemudian digabungkan dengan antibodi gonadotropin β (β-HCG) yang berlabel HRP, dan selepas pembasuhan antibodi-enzim, dan selepas pembasuh yang berlabel, dan selepas itu, dan selepas pembasuh yang dilabelkan, dan selepas pembasuhan antibodi-enzim, dan selepas itu adalah substrate antibodi, dan selepas pembasuh yang berlabel, dan selepas cuci teratur, dan selepas pembasuh yang berlabel, dan selepas cuci teratur, dan selepas pembasuh yang dilabelkan, dan selepas itu adalah cuci antibodi-enzim, dan selepas cuci yang dilabelkan, dan selepas itu adalah cuci antibodi-enzim, Ditambah untuk pembangunan warna. TMB ditukar menjadi biru di bawah pemangkinan enzim HRP, dan menjadi kuning terakhir di bawah tindakan asid. Kedalaman warna berkorelasi positif dengan villous villous gonadotropin β (β-HCG) dalam sampel. Penyerapan (nilai OD) diukur dengan pembaca mikroplat pada panjang gelombang 450 nM, dan kepekatan porcine β-manusia chorionic gonadotropin (β-HCG) dalam sampel dikira oleh lengkung standard.
Komposisi Kit:
1 20 kali penyelesaian basuh tertumpu 30ml × 1 botol 7 Stop Solution 6ml × 1 botol
2 enzim label reagen 6ml × 1 botol 8 standard (270μg / l) 0.5ml × 1 botol
3 Label Enzim Bersalut Plat 12 Wells × 8 Strip 9 Standard Dilution 1.5ml × 1 Botol
4 Contoh pencair 6ml × 1 botol 10 Arahan 1 Salinan
5 Pemaju Penyelesaian 6ml × 1 Botol 11 2 Filem Pengedap
6 pemaju b cecair 6ml × 1 / botol 12 beg tertutup 1
Keperluan Spesimen:
1. Spesimen diekstrak secepat mungkin selepas pengumpulan, dan pengekstrakan dilakukan mengikut kesusasteraan yang relevan, dan eksperimen harus dilakukan secepat mungkin setelah pengekstrakan. Sekiranya ujian tidak dapat dilakukan dengan serta -merta, spesimen boleh disimpan pada -20 ℃, tetapi pembekuan dan pencairan berulang harus dielakkan
2. Sampel yang mengandungi NAN3 tidak dapat dikesan kerana NAN3 menghalang aktiviti peroksidase (HRP) lobak.
Langkah-langkah:
1. Pencairan dan pemuatan produk standard: Tetapkan 10 sumur standard pada plat bersalut enzim, tambah 100 μl produk standard dalam telaga pertama dan kedua, dan kemudian tambahkan produk standard di telaga pertama dan kedua. 50μl pencair, campurkan dengan baik; Kemudian ambil 100μl dari sumur pertama dan kedua sumur dan tambahkannya ke telaga ketiga dan keempat masing -masing, dan kemudian tambahkan 50μl penyelesaian pencairan standard ke telaga ketiga dan keempat masing -masing, campurkan dengan baik kemudian ambil 50μl setiap satu di telaga ketiga dan keempat dan buangnya, kemudian tambahkan 50μl setiap satu ke telaga kelima dan keenam, dan kemudian tambah 50ul penyelesaian pencairan standard kepada telaga kelima dan keenam masing -masing, dan campurkan dengan baik; Selepas mencampurkan, ambil 50μL dari telaga kelima dan keenam dan tambahkannya ke telaga ketujuh dan kelapan masing -masing. Kemudian tambah 50μl penyelesaian pencairan standard ke telaga ketujuh dan kelapan masing -masing. Ambil 50μl dari lapan telaga dan tambahkannya ke telaga kesembilan dan kesepuluh. Kemudian tambahkan 50μl penyelesaian pencairan standard kepada telaga kesembilan dan kesepuluh masing -masing. Selepas mencampurkan, ambil 50μl dari telaga kesembilan dan kesepuluh dan buang. (Selepas pencairan, jumlah setiap sumur adalah 50μL, dan kepekatannya ialah 180μg / L, 120μg / L, 60μg / L, 30μg / L, 15μg / L).
2. Tambah sampel: Sediakan telaga kosong (telaga kawalan kosong tidak menambah sampel dan reagen enzim, selebihnya langkah -langkah yang sama) dan telaga sampel yang akan diuji. Tambah 40μl sampel pencair ke sampel ujian telaga plat bersalut enzim, dan kemudian tambah 10μL sampel ujian (pencairan akhir sampel adalah 5 kali). Tambah sampel dan tambahkan sampel ke bahagian bawah telaga mikroplat, cuba jangan menyentuh dinding telaga, goncang perlahan -lahan untuk dicampur.
3. Inkubasi: Tutup plat dengan filem pengedap dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 30 minit.
4. Penyelesaian Pencampuran: Cairkan 20 kali cecair mencuci pekat dengan air suling 20 kali dan rizab
5. Mencuci: Berhati -hati mengupas filem pengedap, buang cecair, spin kering, isi setiap sumur dengan penyelesaian basuh, biarkan ia berdiri selama 30 saat dan buang, ulangi 5 kali dan pat kering.
6. Tambah enzim: Tambah 50μl reagen label enzim ke setiap sumur, kecuali kosong.
7. Inkubasi: Operasi adalah sama dengan 3.
8. Mencuci: Operasi adalah sama dengan 5.
9. Perkembangan Warna: Tambah 50μl Pemaju A ke setiap sumur, dan kemudian tambahkan 50μl pemaju B, campurkan perlahan -lahan, dan berkembang warna pada 37 ℃ dalam kegelapan
15 minit.
10. Penamatan: Tambah 50μl penyelesaian berhenti untuk setiap telaga untuk menghentikan reaksi (pada masa ini biru akan beralih kepada kuning).
11. Penentuan: Ukur penyerapan (nilai OD) setiap sumur dalam urutan dengan penghawa dingin kosong pada sifar dan panjang gelombang 450 nm. Pengukuran harus dijalankan dalam masa 15 minit selepas menambah penyelesaian berhenti.
Pengiraan:
Mengambil kepekatan standard sebagai abscissa dan nilai OD sebagai ordinat, lukis lengkung standard pada kertas koordinat, dan cari kepekatan yang sepadan dari lengkung standard mengikut nilai OD sampel; berlipat ganda oleh faktor pencairan; atau gunakan kepekatan standard Kirakan persamaan regresi linear lengkung standard dengan nilai OD, gantikan nilai OD sampel ke dalam persamaan, hitung kepekatan sampel, dan kalikan dengan faktor pencairan untuk mendapatkan kepekatan sebenar sampel.
Langkah berjaga-berjaga:
1. Kit harus diambil dari persekitaran yang disejukkan dan disesuaikan dengan suhu bilik selama 15-30 minit sebelum digunakan. Sekiranya plat bersalut enzim dibongkar selepas pembukaan, jalur harus disimpan dalam beg yang dimeteraikan.
2. Kristal boleh dicetuskan dalam cecair basuh pekat, yang boleh dipanaskan dan dibubarkan dalam mandi air semasa pencairan, dan hasilnya tidak akan terjejas semasa mencuci.
3. Sampler hendaklah digunakan pada setiap langkah tambahan sampel, dan ketepatannya harus diperiksa secara teratur untuk mengelakkan kesilapan ujian. Adalah lebih baik untuk mengawal masa pensampelan dalam masa 5 minit. Sekiranya terdapat banyak spesimen, disarankan untuk menggunakan pistol voli untuk menambah sampel.
4. Sila buat lengkung standard pada masa yang sama setiap pengukuran, sebaiknya membuat lubang ganda. Jika kandungan bahan yang akan diuji dalam spesimen terlalu tinggi (nilai OD sampel adalah lebih besar daripada nilai OD dari sumur pertama yang baik), sila cairkannya dengan beberapa (n kali) tertentu pencair sampel dan kemudian menentukannya. Pelbagai (× N × 5).
5. Filem pengedap adalah terhad kepada penggunaan sekali untuk mengelakkan pencemaran silang.
6. Sila simpan substrat dari cahaya.
7. Ketat ikut arahan, dan keputusan ujian mesti ditentukan oleh pembaca mikroplate.
8. Semua sampel, mencuci cecair dan pelbagai sisa harus dianggap sebagai agen berjangkit.
9. Komponen kumpulan yang berlainan reagen ini tidak boleh dicampur.
10. Jika terdapat perbezaan dengan Manual Bahasa Inggeris, Manual Bahasa Inggeris akan diguna pakai.
Julat Peperiksaan:
10μg / l -200μg / l
Spesifikasi:
96 Servis / Kondisi Penyimpanan Kotak dan Tarikh Tamat Tempoh
1. Penyimpanan Kit :; 2-8 ℃.
2. Kesahan: 6 bulan