Parcine β-humaan chorion gonadotropine (β-HCG) enzym-gekoppelde immunoassay kit instructiehandleiding Deze kit is alleen voor onderzoeksgebruik.
Drugsnaam:
Generieke naam: Porcine Beta Human Chorionic Gonadotropin (β-HCG) ELISA-kit
gebruik van gebruik:
Deze kit wordt gebruikt voor de bepaling van β-humaan chorion gonadotropine (β-HCG) in varkensserum, plasma en gerelateerde vloeibare monsters.
Experimenteel principe:
Deze kit gebruikt de sandwichmethode met dubbele antilichamen om het niveau van pandcine β-humaan chorion gonadotropine (β-HCG) in het monster te bepalen. Microporeuze platen werden bekleed met gezuiverd varkens β-humaan chorion gonadotropine (β-HCG) antilichaam om vaste fase-antilichamen te maken. Parcine β-humaan chorion-gonadotropine (β- HCG), vervolgens gecombineerd met HRP-gelabeld menselijk villous gonadotropine β (β-HCG) antilichaam om een antilichaam-antigen-enzyme-gelabeld antilichaamcomplex te vormen, en het substraat TMB is het substraat, het substraat TMB is toegevoegd voor kleurontwikkeling. TMB wordt omgezet in blauw onder de katalyse van HRP -enzym en in het uiteindelijke geel onder de werking van zuur. De kleurdiepte is positief gecorreleerd met menselijke villous gonadotropine β (β-HCG) in het monster. De absorptie (OD-waarde) werd gemeten met een microplaatlezer bij een golflengte van 450 nM en de concentratie van varkens β-humaan chorion gonadotropine (β-HCG) in het monster werd berekend door een standaardcurve.
Kitcompositie:
1 20 keer geconcentreerde wasoplossing 30 ml x 1 fles 7 Stopoplossing 6 ml x 1 fles
2 Enzym Labelreagens 6 ml × 1 fles 8 Standaard (270 μg / L) 0,5 ml x 1 fles
3 Enzymlabel gecoate plaat 12 putten × 8 strips 9 Standaard verdunningen 1,5 ml × 1 fles
4 Voorbeeld verdunningsmiddel 6 ml × 1 fles 10 instructies 1 kopie
5 Developer Een oplossing 6 ml × 1 fles 11 2 afdichtingsfilm
6 Developer B vloeistof 6 ml × 1 / fles 12 afgesloten zak 1
Specimen -vereisten:
1. Specimens worden zo snel mogelijk na verzameling geëxtraheerd en extractie wordt uitgevoerd volgens de relevante literatuur en experimenten moeten zo snel mogelijk na extractie worden uitgevoerd. Als de test niet onmiddellijk kan worden uitgevoerd, kan het monster worden opgeslagen bij -20 ℃, maar herhaald bevriezing en ontdooien moeten worden vermeden
2. De monsters die NAN3 bevatten, kunnen niet worden gedetecteerd omdat Nan3 de activiteit van mierikswortelperoxidase (HRP) remt.
Stappen:
1. Verdunning en laad van standaardproducten: stel 10 standaardputten in op de enzym-gecoate plaat, voeg 100 ul van de standaardproducten toe in de eerste en tweede putten en voeg vervolgens de standaardproducten toe aan de eerste en tweede putten. 50μl verdunningsmiddel, goed mengen; Neem dan 100 ul vanaf de eerste put en de tweede put en voeg ze toe aan respectievelijk de derde en vierde putten, en voeg vervolgens 50 ul standaard verdunningsoplossing toe aan respectievelijk de derde en vierde putten, meng goed en neem dan 50μl elk in de derde en vierde putten en gooi het weg, voeg dan elk 50 ul toe aan de vijfde en zesde putten, en voeg vervolgens 50Ul van de standaard verdunningsoplossing toe aan respectievelijk de vijfde en zesde putten, en meng goed; Neem na het mengen, neem 50μl van de vijfde en zesde putten en voeg ze toe aan respectievelijk de zevende en achtste putten. Voeg vervolgens 50 ul standaard verdunningsoplossing toe aan respectievelijk de zevende en achtste putten. Neem 50 ul van de acht putten en voeg ze toe aan de negende en tiende putten. Voeg vervolgens 50 ul van de standaard verdunningsoplossing toe aan respectievelijk de negende en tiende putten. Neem na het mengen, neem 50μl van de negende en tiende putten en gooi weg. (Na verdunning is het volume van elke putje 50 μl en zijn de concentraties 180 μg / L, 120 μg / L, 60 μg / L, 30 μg / L, 15 μg / L).
2. Toevoeg monsters: stel lege putten in (de lege besturingsputjes voegen geen monsters en enzymreagentia toe, de rest van de stappen zijn hetzelfde) en de te testen monsterputten. Voeg 40 μl monsterverdunnend toe aan het testmonsterput van de enzym-gecoate plaat en voeg vervolgens 10 μl van het testmonster toe (de uiteindelijke verdunning van het monster is 5 keer). Voeg het monster toe en voeg het monster toe aan de onderkant van de put van de microplaat, probeer de wand van de put niet aan te raken, schud zachtjes om te mengen.
3. Incubatie: sluit de plaat af met de afdichtingsfilm en incubeer 30 minuten bij 37 ° C.
4. Mengoplossing: verdun 20 keer geconcentreerde wasvloeistof met gedestilleerd water 20 keer en reserveer
5. Wasen: pel de afdichtingsfilm zorgvuldig af, gooi de vloeistof weg, draai droog, vul elk put met de wasoplossing, laat het 30 seconden staan en weggooien, herhaal 5 keer en klop droog.
6. Voeg enzym toe: voeg 50μl enzymlabelreagens toe aan elk putje, behalve blanco goed.
7. Incubatie: de bewerking is dezelfde als 3.
8. Wassen: de bewerking is dezelfde als 5.
9. Kleurontwikkeling: voeg 50μl ontwikkelaar A toe aan elk putje en voeg vervolgens 50 ul ontwikkelaar B toe, meng zachtjes en ontwikkel kleur bij 37 ℃ in het donker
15 minuten.
10. Beëindiging: voeg 50 ul stopoplossing toe aan elk putje om de reactie te stoppen (op dit moment wordt het blauw geel).
11. Bepaling: meet de absorptie (OD -waarde) van elke put in volgorde met de lege airconditioner bij nul en 450 nm golflengte. De meting moet binnen 15 minuten worden uitgevoerd na het toevoegen van de stopoplossing.
Berekening:
De concentratie van de standaard als de abscis en de OD -waarde als de ordinaat nemen, teken een standaardcurve op het coördinaatpapier en vind de overeenkomstige concentratie uit de standaardcurve volgens de OD -waarde van het monster; vermenigvuldigen met de verdunningsfactor; of gebruik de concentratie van de standaard bereken de lineaire regressievergelijking van de standaardcurve door de OD -waarde, vervang de OD -waarde van het monster in de vergelijking, bereken de monsterconcentratie en vermenigvuldig deze door de verdunningsfactor om de werkelijke concentratie te verkrijgen het voorbeeld.
Preventieve maatregelen:
1. De kit moet uit de gekoelde omgeving worden gehaald en gedurende 15-30 minuten voor gebruik bij kamertemperatuur worden geëquilibreerd. Als de met enzym gecoate plaat na opening niet wordt afgesloten, moet de strook worden bewaard in een afgesloten zak.
2. Kristallen kunnen worden neergeslagen in de geconcentreerde wasvloeistof, die kan worden verwarmd en opgelost in een waterbad tijdens verdunning, en de resultaten worden niet beïnvloed tijdens het wassen.
3. De sampler moet worden gebruikt bij elke stap van de monster -toevoeging en de nauwkeurigheid moet regelmatig worden gecontroleerd om testfouten te voorkomen. Het is het beste om de bemonsteringstijd binnen 5 minuten te regelen. Als er veel exemplaren zijn, wordt het aanbevolen om een volleypistool te gebruiken om monsters toe te voegen.
4. Maak een standaardcurve tegelijkertijd van elke meting, het is het beste om een dubbel gat te maken. Als de inhoud van de te testen stof in het monster te hoog is (de OD -waarde van het monster is groter dan de OD -waarde van de eerste put van de standaardput), verdun deze dan met een bepaald meerdere (n keer) van het monster verdunningsmiddel en bepaal het vervolgens. Meerdere (× N × 5).
5. De afdichtingsfilm is beperkt tot eenmalig gebruik om kruisbesmetting te voorkomen.
6. Houd het substraat uit de buurt van licht.
7. Volg de instructies strikt en de testresultaten moeten worden bepaald door de microplaatlezer.
8. Alle monsters, het wassen van vloeistoffen en verschillende afvalstoffen moeten worden behandeld als besmettelijke middelen.
9. De componenten van verschillende batches van dit reagens mogen niet worden gemengd.
10. Als er een verschil is met de Engelse handleiding, zal de Engelse handleiding de overhand hebben.
Onderzoeksbereik:
10 μg / L -200μg / L
specificatie:
96 porties / doosopslagomstandigheden en vervaldatum
1. Kitopslag :; 2-8 ℃.
2. Geldigheid: 6 maanden