Manualna instrukcja obsługi gonadotropiny (β-HCG) ze świńskiego β-ludzkiego gonadotropiny (β-HCG).
Nazwa narkotyków:
Nazwa ogólna: świńska beta ludzka gonadotropina (β-HCG) Zestaw ELISA
Cel użytkowania:
Zestaw ten stosuje się do oznaczania gonadotropiny na kosmówek naczyniowych β-ludzkiej (β-HCG) w surowicy świń, osoczu i powiązanych próbkach cieczy.
Zasada eksperymentalna:
Zestaw ten wykorzystuje metodę kanapki z podwójnym przeciwciałem do określenia poziomu gonadotropiny na kosmówki β-ludzkiej β-ludzkiej (β-HCG) w próbce. Płytki mikroporowate powleczono oczyszczonym przeciwciałem gonadotropiny β-ludzkiej β-ludzkiej (β-HCG) w celu wytwarzania przeciwciał w fazie stałej. Śmiecka β-ludzka gonadotropina (β-HCG), a następnie w połączeniu z ludzkim przeciwciałem gonadotropiny β (β-HCG), a po dokładnym myciu, substrat TMB), a po dokładnym myciu, substrat TMB jest to substrat TMB jest Dodano do rozwoju kolorów. TMB jest przekształcany w niebieski pod katalizą enzymu HRP i na końcowy żółty pod działaniem kwasu. Głębokość kolorów jest dodatnio skorelowana z ludzką kosmkami gonadotropiny β (β-HCG) w próbce. Absorbancję (wartość OD) zmierzono za pomocą czytnika mikropłytek o długości fali 450 nm, a stężenie gonadotropiny naczyniowej świńsko-ludzkiej β-ludzkiej (β-HCG) w próbce obliczono za pomocą krzywej standardowej.
Kompozycja zestawu:
1 20 razy stężony roztwór mycia 30 ml × 1 butelka 7 Stop Roztwór 6 ml × 1 butelka
2 standardowe standardowe butelkę etykiety enzymatycznej 6 ml × 1 (270 μg / l) 0,5 ml × 1
3 Enzymatyka Płytka pokryta 12 Studzien × 8 paski 9 Standardowe rozcieńczenia 1,5 ml × 1 butelka
4 Próbka rozcieńcza 6 ml × 1 butelka 10 instrukcji 1 Kopia
5 Deweloper Roztwór 6 ml × 1 butelka 11 2 Film uszczelniający
6 Deweloper B płyn 6 ml × 1 / butelka 12 Uszczelniona torba 1
Wymagania próbki:
1. Próbki są wyodrębniane tak szybko, jak to możliwe po pobraniu, a ekstrakcja jest wykonywana zgodnie z odpowiednią literaturą, a eksperymenty należy przeprowadzić tak szybko, jak to możliwe po ekstrakcji. Jeśli test nie można wykonać natychmiast, próbkę można przechowywać w temperaturze -20 ℃, ale należy unikać powtarzanego zamrażania i rozmrożenia
2. Próbki zawierających NAN3 nie można wykryć, ponieważ NAN3 hamuje aktywność peroksydazy chrzanowej (HRP).
Kroki:
1. Rozcieńczenie i ładowanie standardowych produktów: Ustaw 10 standardowych studzienek na płytce powlekanej enzymatycznej, dodaj 100 μl standardowych produktów w pierwszym i drugim studzience, a następnie dodaj standardowe produkty w pierwszym i drugim studzience. 50 μl rozcieńczonego, dobrze wymieszaj; Następnie weź 100 μl z pierwszej studni i drugiej studni i dodaj je odpowiednio do trzeciego i czwartego studzienki, a następnie dodaj 50 μl standardowego roztworu rozcieńczenia odpowiednio do trzeciego i czwartego studzienki, a następnie dobrze weź 50 μl w trzecim i czwartym studzience i odrzuć go, a następnie dodaj 50 μl do piątej i szóstej studzienki, a następnie dodaj 50ul standardowego roztworu rozcieńczenia odpowiednio do piątej i szóstej studni, i dobrze wymieszaj; Po zmieszaniu weź 50 μl ze piątych i szóstej studni i dodaj je odpowiednio do siódmego i ósmego studni. Następnie dodaj 50 μl standardowego roztworu rozcieńczenia odpowiednio do siódmego i ósmego studzienki. Weź 50 μl z ośmiu studzienek i dodaj je do dziewiątej i dziesiątej studni. Następnie dodaj 50 μl standardowego roztworu rozcieńczenia odpowiednio dziewiątych i dziesiątych studzienki. Po zmieszaniu weź 50 μl z dziewiątych i dziesiątych studzienek i odrzucić. (Po rozcieńczeniu objętość każdej studzienki wynosi 50 μl, a stężenia wynosi 180 μg / L, 120 μg / L, 60 μg / L, 30 μg / L, 15 μg / l).
2. Dodaj próbki: Ustaw puste studzienki (puste studzienki sterujące nie dodają próbek i odczynników enzymowych, reszta kroków jest takie same) i testowane studnie. Dodaj 40 μl rozcieńczalnika próbki do studni próbki testowej płyty powlekanej enzymem, a następnie dodaj 10 μl próbki testowej (końcowe rozcieńczenie próbki wynosi 5 razy). Dodaj próbkę i dodaj próbkę do dna studni mikropłytek, staraj się nie dotykać ściany studni, delikatnie wstrząśnij, aby się wymieszać.
3. Inkubacja: uszczelnij płytkę folią uszczelniającą i inkubuj w 37 ° C przez 30 minut.
4. Roztwór mieszania: Rozcieńcz 20 razy stężony ciecz prania z wodą destylowaną 20 razy i rezerwę
5. Mycie: Ostrożnie zdejmij folię uszczelniającą, odrzuć płyn, sucha, napełnij każdą studnię roztworem mycia, pozwól mu stać przez 30 sekund i odrzucić, powtórz 5 razy i osuszają.
6. Dodaj enzym: Dodaj 50 μl odczynnika etykiety enzymu do każdej studzienki, z wyjątkiem pustej studni.
7. Inkubacja: Operacja jest taka sama jak 3.
8. Mycie: Operacja jest taka sama jak 5.
9. Rozwój koloru: Dodaj 50 μl programisty A do każdej studzienki, a następnie dodaj 50 μl programisty B, delikatnie wymieszaj i rozwijają kolor przy 37 ℃ w ciemności
15 minut.
10. Zakończenie: Dodaj 50 μl roztworu stop do każdej studni, aby zatrzymać reakcję (w tym czasie niebieski przejdzie do żółtego).
11. Określenie: Zmierz absorbancję (wartość OD) każdej studzienki w sekwencji za pomocą pustego klimatyzatora przy zerowej i 450 nm długości fali. Pomiar należy przeprowadzić w ciągu 15 minut po dodaniu roztworu stop.
Obliczenie:
Przyjmując stężenie standardu jako odciętą i wartość OD jako rzędną, narysuj krzywą standardową na papierze współrzędnym i znajdź odpowiednie stężenie z krzywej standardowej zgodnie z wartością OD próbki; pomnóż przez współczynnik rozcieńczenia; lub użyj stężenia standardowego oblicz równanie regresji liniowej krzywej standardowej wartości OD, zastąp wartość OD próbki na równanie, oblicz stężenie próbki i pomnóż go przez współczynnik rozcieńczenia, aby uzyskać faktyczne stężenie of próbka.
Środki ostrożności:
1. Zestaw należy wyciągnąć ze środowiska chłodzonego i równowagi w temperaturze pokojowej przez 15-30 minut przed użyciem. Jeśli talerz pokryty enzymem jest niesiedzony po otwarciu, pasek należy przechowywać w zapieczętowanej torbie.
2. Kryształy mogą być wytrącone w skoncentrowanej cieczy prania, którą można ogrzewać i rozpuszczać w łaźni wodnej podczas rozcieńczenia, a na wyniki nie będą miały wpływu podczas mycia.
3. Sampler należy użyć na każdym etapie dodawania próbki, a dokładność należy regularnie sprawdzać, aby uniknąć błędów testowych. Najlepiej jest kontrolować czas próbkowania w ciągu 5 minut. Jeśli istnieje wiele próbek, zaleca się użycie pistoletu w siatkówce do dodawania próbek.
4. Proszę wykonać krzywą standardową w tym samym czasie każdego pomiaru, najlepiej zrobić podwójną dziurę. Jeśli zawartość substancji, która ma być testowana w próbce, jest zbyt wysoka (wartość OD próbki jest większa niż wartość OD pierwszej studni standardowej), rozcieńcz ją za pomocą określonej wielokrotności (n razy) Próbka rozcieńczona, a następnie określa ją. Wiele (× n × 5).
5. Film uszczelniający jest ograniczony do jednorazowego użytku, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego.
6. Proszę, trzymaj podłoże z dala od światła.
7. Ściśle przestrzegaj instrukcji, a wyniki testu muszą być określone przez czytnik mikropłytek.
8. Wszystkie próbki, mycie płynów i różne odpady powinny być traktowane jako środki zakaźne.
9. Składniki różnych partii tego odczynnika nie powinny być mieszane.
10. Jeśli istnieje jakakolwiek różnica w języku angielskim angielskim, angielska instrukcja przeważa.
Zakres egzaminu:
10 μg / l -200 μg / l
specyfikacja:
96 Warunki przechowywania i daty przechowywania skrzynki i data ważności
1. Storage Kit :; 2-8 ℃.
2. Ważność: 6 miesięcy