A gonadotrofina coriônica porcina β-humana (β-HCG) liga o kit de imunoensaio Manual de instrução Este kit é apenas para uso da pesquisa.
Nome do medicamento:
Nome genérico: gonadotrofina coriônica porcina beta (β-hcg) elisa kit
Objetivo de uso:
Este kit é usado para a determinação da gonadotrofina coriônica β-humana (β-HCG) no soro de porco, plasma e amostras líquidas relacionadas.
Princípio experimental:
Este kit usa o método sanduíche de anticorpo duplo para determinar o nível de gonadotrofina coriônica porcina β-humana (β-HCG) na amostra. As placas microporosas foram revestidas com anticorpo purificado de gonadotrofina coriônica porcina-humana (β-HCG) para produzir anticorpos em fase sólida. A gonadotrofina coriônica porcina β-humana (β-hcg), então combinada com a gonadotrofina β (β-HCG) marcada com HRP (β-HCG) para formar um complexo de anticorpo de anticorpo e anticorpo que é a lavagem e a lavagem e a lavagem acentuada, o sub-submarino adicionado para desenvolvimento de cores. O TMB é convertido em azul sob a catálise da enzima HRP e no amarelo final sob a ação do ácido. A profundidade da cor está positivamente correlacionada com a gonadotrofina β (β-HCG) humana na amostra. A absorvância (valor de OD) foi medida com um leitor de microplacas a um comprimento de onda de 450 nm e a concentração de gonadotropina coriônica β-humana porcina (β-HCG) na amostra foi calculada por uma curva padrão.
Composição do kit:
1 20 vezes a solução de lavagem concentrada 30ml × 1 garrafa 7 SOPAR SOLUÇÃO 6ml × 1 garrafa
2 rótulo enzimático reagente 6ml × 1 garrafa 8 padrão (270μg / l) 0,5ml × 1 garrafa
3 Placa revestida com etiqueta enzimática 12 poços × 8 tiras 9 diluições padrão 1,5ml × 1 garrafa
4 Diluente de amostra 6ml × 1 garrafa 10 Instruções 1 cópia
5 Desenvolvedor Uma Solução 6ml × 1 garrafa 11 2 Filme de vedação
6 Desenvolvedor B líquido 6ml × 1 / garrafa 12 bolsa selada 1
Requisitos de amostra:
1. As amostras são extraídas o mais rápido possível após a coleta, e a extração é realizada de acordo com a literatura relevante, e as experiências devem ser realizadas o mais rápido possível após a extração. Se o teste não puder ser realizado imediatamente, o espécime pode ser armazenado em -20 ℃, mas o congelamento e o degelo repetidos devem ser evitados
2. As amostras contendo NAN3 não podem ser detectadas porque a NAN3 inibe a atividade da peroxidase de rábano silvestre (HRP).
Passos:
1. Diluição e carregamento de produtos padrão: defina 10 poços padrão na placa revestida com enzima, adicione 100 μl dos produtos padrão nos primeiros e segundo poços e adicione os produtos padrão nos primeiros e segundo poços. 50μl de diluente, misture bem; Em seguida, pegue 100 μl do primeiro poço e o segundo poço e adicione -os ao terceiro e quarto poços, respectivamente, e adicione 50μl de solução de diluição padrão ao terceiro e quarto poços, respectivamente, misture bem e depois tome 50μl cada no terceiro e quarto poços e descarte -o e adicione 50 μl um aos quinto e sexto poços e adicione 50ul da solução de diluição padrão ao quinto e sexto poços, respectivamente, e misture bem; Após a mistura, pegue 50 μl dos quinto e sexto poços e adicione -os ao sétimo e oitavo poços, respectivamente. Em seguida, adicione 50μl de solução de diluição padrão aos sétimos e oitavos poços, respectivamente. Tire 50μl dos oito poços e adicione -os aos nono e décimo poços. Em seguida, adicione 50μl da solução de diluição padrão aos nono e décimo poços, respectivamente. Após a mistura, pegue 50 μl dos nono e décimo poços e descarte. (Após a diluição, o volume de cada poço é de 50μL e as concentrações são 180μg / L, 120μg / L, 60μg / L, 30μg / L, 15μg / L).
2. Adicione amostras: configure poços em branco (os poços de controle em branco não adicionam amostras e reagentes enzimáticos, o restante das etapas são as mesmas) e os poços de amostra a serem testados. Adicione 40μl de diluente da amostra ao poço de amostra de teste da placa revestida por enzima e adicione 10μl da amostra de teste (a diluição final da amostra é 5 vezes). Adicione a amostra e adicione a amostra à parte inferior do poço da microplaca, tente não tocar na parede do poço, agite suavemente para misturar.
3. Incubação: Sele a placa com o filme de vedação e incubar a 37 ° C por 30 minutos.
4. Solução de mistura: diluir 20 vezes líquido de lavagem concentrado com água destilada 20 vezes e reserva
5. Lavagem: retire cuidadosamente o filme de vedação, descarte o líquido, gire, encha cada poço com a solução de lavagem, deixe -o ficar por 30 segundos e descartar, repita 5 vezes e seque.
6. Adicione enzima: adicione 50μl de reagente da etiqueta enzimática a cada poço, exceto bem em branco.
7. Incubação: a operação é a mesma que 3.
8. Lavagem: A operação é a mesma que 5.
9. Desenvolvimento de cores: adicione 50μl de desenvolvedor A a cada poço e adicione 50μl de desenvolvedor B, misture delicadamente e desenvolva cores a 37 ℃ no escuro
15 minutos.
10. Terminar: adicione 50μl de solução de parada a cada poço para interromper a reação (neste momento o azul se transformará em amarelo).
11. Determinação: Meça a absorvância (valor de OD) de cada poço em sequência com o ar condicionado em branco em zero e 450 nm de comprimento de onda. A medição deve ser realizada dentro de 15 minutos após a adição da solução de parada.
Cálculo:
Tomando a concentração do padrão como a abcissa e o valor de OD como as ordenadas, desenhe uma curva padrão no papel de coordenadas e encontre a concentração correspondente da curva padrão de acordo com o valor da DO da amostra; multiplicar pelo fator de diluição; ou use a concentração do padrão Calcule a equação de regressão linear da curva padrão com o valor da OD, substitua o valor da OD da amostra na equação, calcule a concentração da amostra e multiplique -a pelo fator de diluição para obter a concentração real de a amostra.
Precauções:
1. O kit deve ser retirado do ambiente refrigerado e equilibrado à temperatura ambiente por 15 a 30 minutos antes do uso. Se a placa revestida com enzima não for selada após a abertura, a tira deverá ser armazenada em um saco selado.
2. Os cristais podem ser precipitados no líquido de lavagem concentrado, que pode ser aquecido e dissolvido em banho -maria durante a diluição, e os resultados não serão afetados durante a lavagem.
3. O amostrador deve ser usado em cada etapa da adição de amostra, e a precisão deve ser verificada regularmente para evitar erros de teste. É melhor controlar o tempo de amostragem em 5 minutos. Se houver muitos espécimes, é recomendável usar uma pistola para adicionar amostras.
4. Faça uma curva padrão ao mesmo tempo de cada medição, é melhor fazer um orifício duplo. Se o conteúdo da substância a ser testado na amostra for muito alto (o valor da OD da amostra é maior que o valor de OD do primeiro poço do poço padrão), dilua -o com um certo múltiplo (n vezes) de a amostra diluente e depois determine. Múltiplo (× n × 5).
5. O filme de vedação é limitado ao uso único para evitar a contaminação cruzada.
6. Por favor, mantenha o substrato longe da luz.
7. Siga estritamente as instruções e os resultados do teste devem ser determinados pelo leitor de microplacas.
8. Todas as amostras, líquidos de lavagem e vários resíduos devem ser tratados como agentes infecciosos.
9. Os componentes de diferentes lotes deste reagente não devem ser misturados.
10. Se houver alguma diferença no manual inglês, o manual inglês prevalecerá.
Faixa de exames:
10μg / L -200μg / L
especificação:
96 Condições de armazenamento de porções / caixa e data de validade
1. armazenamento do kit :; 2-8 ℃.
2. Validade: 6 meses