Porcine ß-human chorionic gonadotropin (ß-HCG) enzymbundna immunoanalys kit instruktionsmanual Detta kit är endast för forskningsanvändning.
Drognamn:
Generiskt namn: Porcine Beta Human Chorionic Gonadotropin (ß-HCG) ELISA Kit
Syftet med användning:
Detta kit används för bestämning av p-human chorioniskt gonadotropin (p-HCG) i svinserum, plasma och relaterade vätskeprover.
Experimentell princip:
Detta kit använder den dubbla antikroppsmörgåsmetoden för att bestämma nivån av porcine ß-human chorionic gonadotropin (p-HCG) i provet. Mikroporösa plattor belades med renad svin ß-human korionisk gonadotropin (p-HCG) antikropp för att göra antikroppar med fast fas. Porcine ß-human chorionic gonadotropin (ß- HCG), sedan kombinerat med HRP-märkta humana villous gonadotropin-p (ß-hcg) antikropp för att bilda en antikropp-antigen-enzym-märkt antikroppskomplex och efter grundlig tvätt, är underlaget TMB är TMB Tillagd för färgutveckling. TMB omvandlas till blått under katalysen av HRP -enzym och till den sista gula under verkan av syra. Färgdjupet är positivt korrelerat med humant villous gonadotropin p (p-HCG) i provet. Absorbansen (OD-värdet) mättes med en mikroplattläsare vid en våglängd av 450 nM, och koncentrationen av porcin-p-human-korioniskt gonadotropin (p-HCG) i provet beräknades med en standardkurva.
Kitkomposition:
1 20 gånger koncentrerad tvättlösning 30 ml × 1 flaska 7 stopplösning 6 ml × 1 flaska
2 Enzymetikettreagens 6 ml × 1 flaska 8 Standard (270 ug / L) 0,5 ml × 1 flaska
3 enzymetikettbelagd platta 12 brunnar × 8 remsor 9 standardutspädningar 1,5 ml × 1 flaska
4 Exempelutspädningsmedel 6 ml × 1 flaska 10 Instruktioner 1 Kopia
5 Utvecklare En lösning 6 ml × 1 flaska 11 2 Tätningsfilm
6 Developer B Liquid 6ml × 1 / Bottle 12 Sealed Bag 1
Provkrav:
1. Prover extraheras så snart som möjligt efter insamling, och extraktion utförs enligt relevant litteratur, och experiment bör genomföras så snart som möjligt efter extraktion. Om testet inte kan utföras omedelbart kan provet lagras vid -20 ℃, men upprepad frysning och tining bör undvikas
2. Proverna som innehåller NAN3 kan inte detekteras eftersom NAN3 hämmar porsadish peroxidas (HRP) -aktivitet.
Steg:
1. Utspädning och lastning av standardprodukter: Ställ in 10 standardbrunnar på enzymbelagda plattor, tillsätt 100 ul av standardprodukterna i första och andra brunnarna och tillsätt sedan standardprodukterna i första och andra brunnarna. 50 ul utspädningsmedel, blanda väl; Ta sedan 100 ul från den första brunnen och den andra brunnen och tillsätt dem till den tredje respektive fjärde brunnarna, och tillsätt sedan 50 ul standardutspädningslösning till den tredje respektive fjärde brunnarna, blanda och ta sedan 50 ul vardera i tredje och fjärde brunnarna och kassera det, tillsätt sedan 50 ul vardera till de femte och sjätte brunnarna, och tillsätt sedan 50UL av standardutspädningslösningen till femte respektive sjätte brunnarna och blanda väl; Efter blandningen, ta 50 ul från femte och sjätte brunnarna och tillsätt dem till den sjunde respektive åttonde brunnarna. Tillsätt sedan 50 ul standardutspädningslösning till den sjunde respektive åttonde brunnarna. Ta 50 ul från de åtta brunnarna och tillsätt dem till de nionde och tionde brunnarna. Tillsätt sedan 50 ul av standardutspädningslösningen till de nionde respektive tionde brunnarna. Efter blandningen, ta 50 ul från de nionde och tionde brunnarna och kassera. (Efter utspädning är volymen för varje brunn 50 ul, och koncentrationerna är 180 ug / L, 120 ug / L, 60 ug / L, 30 ug / L, 15μg / L).
2. Lägg till prover: Ställ in tomma brunnar (de tomma kontrollbrunnarna lägger inte till prover och enzymreagens, resten av stegen är desamma) och provbrunnarna som ska testas. Tillsätt 40 ul provutspädningsmedel till testprovet i den enzymbelagda plattan och tillsätt sedan 10 ul av testprovet (den slutliga utspädningen av provet är 5 gånger). Tillsätt provet och tillsätt provet i botten av mikroplattans brunn, försök att inte röra vid väggen i brunnen, skaka försiktigt för att blanda.
3. Inkubation: Försegla plattan med tätningsfilmen och inkubera vid 37 ° C i 30 minuter.
4. Blandningslösning: Späd ut 20 gånger koncentrerad tvättvätska med destillerat vatten 20 gånger och reservera
5. Tvätt: Skala försiktigt av tätningsfilmen, kasta vätskan, snurra torrt, fyll varje brunn med tvättlösningen, låt den stå i 30 sekunder och kassera, upprepa 5 gånger och klappa torrt.
6. Tillsätt enzym: Tillsätt 50 ul enzymetikettreagens till varje brunn, utom tomt brunn.
7. Inkubation: Operationen är densamma som 3.
8. Tvätt: operationen är densamma som 5.
9. Färgutveckling: Lägg till 50 ul utvecklare A till varje brunn och lägg sedan till 50 ul utvecklare B, blanda försiktigt och utveckla färg på 37 ℃ i mörkret
15 minuter.
10. Avslutning: Tillsätt 50 ul stopplösning till varje brunn för att stoppa reaktionen (just nu kommer det blå att bli gult).
11. Bestämning: Mät absorbansen (OD -värdet) för varje brunn i sekvens med den tomma luftkonditioneringen vid noll och 450 nm våglängd. Mätningen bör utföras inom 15 minuter efter tillsats av stopplösningen.
Beräkning:
Genom att ta koncentrationen av standarden som Abscissa och OD -värdet som ordinat, rita en standardkurva på koordinatspapperet och hitta motsvarande koncentration från standardkurvan enligt OD -värdet på provet; multiplicera med utspädningsfaktorn; eller använd koncentrationen av standard Beräkna den linjära regressionsekvationen för standardkurvan med OD -värdet, ersätt OD -värdet på provet i ekvationen, beräkna provkoncentrationen och multiplicera den med utspädningsfaktorn för att erhålla den faktiska koncentrationen av provexemplaret.
Försiktighetsåtgärder:
1. Satsen ska tas ut från den kylda miljön och jämviktas vid rumstemperatur i 15-30 minuter före användning. Om den enzymbelagda plattan är oseglad efter öppnandet, bör remsan förvaras i en förseglad påse.
2. Kristaller kan fällas ut i den koncentrerade tvättvätskan, som kan upphettas och lösas i ett vattenbad under utspädning, och resultaten påverkas inte under tvätt.
3. Provtagaren bör användas vid varje steg i provtillägget och noggrannheten bör regelbundet kontrolleras för att undvika testfel. Det är bäst att kontrollera provtagningstiden inom 5 minuter. Om det finns många exemplar rekommenderas det att använda en volleypistol för att lägga till prover.
4. Gör en standardkurva samtidigt för varje mätning, det är bäst att göra ett dubbelhål. Om innehållet i ämnet som ska testas i provet är för högt (OD -värdet på provet är större än OD -värdet på den första brunnen i standardbrunnen), vänligen utspäd det med en viss flera (n gånger) av Provutspädningsmedel och bestäm sedan det. Flera (× n × 5).
5. Tätningsfilmen är begränsad till engångsanvändning för att undvika korsföroreningar.
6. Håll underlaget borta från ljuset.
7. Följ strikt instruktionerna och testresultaten måste bestämmas av mikroplattläsaren.
8. Alla prover, tvättvätskor och olika avfall bör behandlas som smittämnen.
9. Komponenterna i olika partier i detta reagens får inte blandas.
10. Om det finns någon skillnad med den engelska manualen, ska den engelska manualen råda.
Examensområde:
10μg / l -200 μg / l
Specifikation:
96 portioner / lådförvaringsförhållanden och utgångsdatum
1. Kitlagring:; 2-8 ℃.
2. Giltighet: 6 månader