เวลาทดสอบการตั้งครรภ์

แอนติบอดีต่อต้าน HCG ของมนุษย์ IgA (HCG-IGA) ELISA

คำแนะนำชุดสำหรับใช้รีเอเจนต์นี้ใช้สำหรับการใช้งานวิจัยเท่านั้น

วัตถุประสงค์: ชุดนี้ใช้เพื่อกำหนดเนื้อหาของแอนติบอดีต่อต้าน HCG IgA (HCG-IGA) ในซีรั่มของมนุษย์พลาสมาและตัวอย่างของเหลวที่เกี่ยวข้อง

หลักการทดลอง:
ชุดนี้ใช้วิธีแซนวิชแอนติบอดีคู่เพื่อกำหนดระดับของแอนติบอดีต่อต้าน HCG ของมนุษย์ IgA (HCG-IGA) ในตัวอย่าง แผ่นจุลภาคถูกเคลือบด้วยแอนติบอดีแอนติบอดีต่อต้าน HCG ของมนุษย์ที่บริสุทธิ์ IgA (HCG-IGA) แอนติบอดีเพื่อเตรียมแอนติบอดีของแข็งเฟส Anti-HCG antibody IgA (HCG-IGA) ถูกเพิ่มเข้าไปใน microwells ที่เคลือบด้วย mAb ในทางกลับกันจากนั้นติดป้ายด้วย HRP แอนติบอดีต่อต้านมนุษย์แพะผูกไว้เพื่อสร้างแอนติบอดีแอนติบอดีแอนติบอดี้เอนไซม์ หลังจากล้างอย่างละเอียด TMB พื้นผิวจะถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อการพัฒนาสี TMB ถูกแปลงเป็นสีน้ำเงินภายใต้การเร่งปฏิกิริยาของเอนไซม์ HRP และเป็นสีเหลืองสุดท้ายภายใต้การกระทำของกรด ความลึกของสีมีความสัมพันธ์เชิงบวกกับแอนติบอดีต่อต้าน HCG IgA (HCG-IGA) ในตัวอย่าง การดูดกลืนแสง (ค่า OD) ถูกวัดด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลทที่ความยาวคลื่น 450 นาโนเมตรและความเข้มข้นของแอนติบอดีต่อต้าน HCG ของมนุษย์ IgA (HCG-IGA) ในตัวอย่างถูกคำนวณโดยเส้นโค้งมาตรฐาน

องค์ประกอบชุด:
Kit Composition 48 Well Configuration 96 คำแนะนำการจัดเก็บการกำหนดค่าที่ดี 1 ส่วน 1 ส่วนที่ปิดผนึกแผ่นฟิล์ม 2 ชิ้น (48) 2 ชิ้น (96)
ถุงปิดผนึกหนึ่งใบและแผ่นเคลือบเอนไซม์หนึ่งแผ่น 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃มาตรฐานที่เก็บรักษาไว้: 54pg / ml 0.5ml × 1 ขวด 0.5ml × 1 มาตรฐานที่เก็บรักษาไว้ 1.5ml × 2-8 ℃× 1 ขวด 1.5 ขวด 1.5 ml × 1 ขวดรีเอเจนต์ที่ติดฉลากเอนไซม์ที่เก็บไว้ที่ 2-8 ℃ 3 mL × 1 ขวด 6 มล. × 1 ขวดตัวอย่างเจือจางที่ 2-8 ℃ 3 มล. × 1 ขวด 6 มล. × 1 ขวดเก็บสีที่ 2 -8 ℃น้ำยาสารละลาย 3 มิลลิลิตร× 1 ขวด 6 มล. × 1 ขวด 2-8 ° C นักพัฒนาที่เก็บข้อมูล B โซลูชัน 3 มิลลิลิตร× 1 ขวด 6 มล. × 1 ขวด 2-8 °ซ ขวด 2- เก็บสารละลายซักเข้มข้นที่ 8 ℃ (20ml × 20 ครั้ง) × 1 ขวด (20ml × 30 ครั้ง) × 1 ขวดที่ 2-8 ℃
1. เซรั่ม: อุณหภูมิห้องเลือดแข็งตัวตามธรรมชาติเป็นเวลา 10-20 นาทีหมุนเหวี่ยงประมาณ 20 นาที (2000-3000 รอบต่อนาที) รวบรวม supernatant อย่างระมัดระวังและหมุนเหวี่ยงอีกครั้งหากการตกตะกอนปรากฏขึ้นในระหว่างการจัดเก็บ
2. พลาสมา: EDTA หรือโซเดียมซิเตรตควรได้รับการคัดเลือกเป็นสารกันเลือดแข็งตามข้อกำหนดของชิ้นงานผสมกันเป็นเวลา 10-20 นาทีและหมุนเหวี่ยงประมาณ 20 นาที (2000-3000 รอบต่อนาที) รวบรวม supernatant อย่างระมัดระวัง หากรูปแบบการตกตะกอนในระหว่างการจัดเก็บควรจะหมุนเหวี่ยงอีกครั้ง
3. ปัสสาวะ: รวบรวมในหลอดที่ผ่านการฆ่าเชื้อและหมุนเหวี่ยงประมาณ 20 นาที (2000-3000 รอบต่อนาที) รวบรวม supernatant อย่างระมัดระวัง หากมีการตกตะกอนในระหว่างการเก็บรักษาหมุนเหวี่ยงอีกครั้ง เยื่อหุ้มปอดและน้ำในช่องท้องการดำเนินการอ้างอิงของเหลวในสมอง
4. การเพาะเลี้ยงเซลล์ supernatant: เมื่อตรวจจับส่วนประกอบที่หลั่งออกมาให้รวบรวมด้วยหลอดที่ผ่านการฆ่าเชื้อ เครื่องหมุนเหวี่ยงประมาณ 20 นาที (2000-3000 รอบต่อนาที) รวบรวม supernatant อย่างระมัดระวัง เมื่อตรวจจับส่วนประกอบภายในเซลล์ให้เจือจางเซลล์แขวนลอยด้วย PBS (Ph7.2-7.4) และความเข้มข้นของเซลล์จะสูงถึง 1 ล้าน / มล. ผ่านการแช่แข็งซ้ำ ๆ และการละลายเซลล์จะถูกทำลายและส่วนประกอบภายในเซลล์จะถูกปล่อยออกมา เครื่องหมุนเหวี่ยงประมาณ 20 นาที (2000-3000 รอบต่อนาที) รวบรวม supernatant อย่างระมัดระวัง หากรูปแบบการตกตะกอนในระหว่างการจัดเก็บควรจะหมุนเหวี่ยงอีกครั้ง
5. จัดระเบียบตัวอย่าง: หลังจากตัดชิ้นงานให้ชั่งน้ำหนัก เพิ่ม PBS จำนวนหนึ่ง ph7.4 แช่แข็งและประหยัดด้วยไนโตรเจนเหลวอย่างรวดเร็วสำหรับการใช้งานในภายหลัง หลังจากชิ้นงานละลายมันยังคงรักษาอุณหภูมิ 2-8 ° C เพิ่ม PBS จำนวนหนึ่ง (Ph7.4) และทำให้ชิ้นงานเป็นเนื้อเดียวกันด้วยคู่มือหรือ homogenizer เครื่องหมุนเหวี่ยงประมาณ 20 นาที (2000-3000 รอบต่อนาที) รวบรวม supernatant อย่างระมัดระวัง หลังจากการลดลงส่วนหนึ่งจะต้องทดสอบและส่วนที่เหลือจะถูกแช่แข็งสำหรับการใช้งานในอนาคต
6. ตัวอย่างควรสกัดโดยเร็วที่สุดหลังจากรวบรวม การสกัดควรดำเนินการตามวรรณกรรมที่เกี่ยวข้อง การทดลองควรดำเนินการโดยเร็วที่สุดหลังจากการสกัด หากการทดสอบไม่สามารถทำได้ทันทีตัวอย่างสามารถเก็บไว้ที่ -20 ℃ แต่ควรหลีกเลี่ยงการแช่แข็งซ้ำ ๆ และการละลาย
7. ตัวอย่างที่มี NAN3 ไม่สามารถตรวจพบได้เนื่องจาก NAN3 ยับยั้งกิจกรรมของพืชชนิดหนึ่ง peroxidase (HRP)
ขั้นตอน:
1. การเจือจางและการโหลดผลิตภัณฑ์มาตรฐาน: ตั้งค่า 10 หลุมมาตรฐานบนแผ่นเคลือบเอนไซม์เพิ่ม 100 μlของผลิตภัณฑ์มาตรฐานในหลุมแรกและที่สองจากนั้นเพิ่มผลิตภัณฑ์มาตรฐานในหลุมแรกและที่สอง 50μlของ diluent ผสมให้เข้ากัน; จากนั้นใช้100μlจากบ่อน้ำแรกและบ่อน้ำที่สองและเพิ่มลงในหลุมที่สามและสี่ตามลำดับจากนั้นเพิ่มสารละลายเจือจางมาตรฐาน50μLลงในหลุมที่สามและสี่ตามลำดับ และทิ้งไว้แล้วเพิ่ม50μlแต่ละอันลงในหลุมที่ห้าและหกจากนั้นเพิ่ม 50UL ของสารละลายเจือจางมาตรฐานลงในหลุมที่ห้าและหกตามลำดับและผสมให้เข้ากัน หลังจากผสมให้ใช้เวลา50μlจากหลุมที่ห้าและหกและเพิ่มเข้าไปในหลุมที่เจ็ดและแปดตามลำดับ จากนั้นเพิ่มสารละลายเจือจางมาตรฐาน50μLลงในหลุมที่เจ็ดและแปดตามลำดับ ใช้เวลา50μlจากแปดหลุมและเพิ่มลงในหลุมที่เก้าและสิบ จากนั้นเพิ่ม50μLของสารละลายเจือจางมาตรฐานให้กับหลุมที่เก้าและสิบตามลำดับ หลังจากผสมให้ใช้เวลา50μlจากหลุมที่เก้าและสิบและทิ้ง (หลังจากเจือจางปริมาตรของแต่ละหลุมคือ50μlและความเข้มข้นคือ 36pg / ml, 24pg / ml, 12pg / ml, 6pg / ml, 3pg / ml)
2. เพิ่มตัวอย่าง: ตั้งค่าหลุมว่างเปล่า (หลุมควบคุมเปล่าไม่เพิ่มตัวอย่างและรีเอเจนต์เอนไซม์ส่วนที่เหลือของขั้นตอนเดียวกัน) และหลุมตัวอย่างที่จะทดสอบ เพิ่มตัวอย่าง40μLของตัวอย่างการทดสอบที่ดีของแผ่นเคลือบเอนไซม์จากนั้นเพิ่มตัวอย่างทดสอบ10μL (การเจือจางสุดท้ายของตัวอย่างคือ 5 ครั้ง) เพิ่มตัวอย่างและเพิ่มตัวอย่างที่ด้านล่างของบ่อน้ำของไมโครเพลทพยายามอย่าแตะต้องผนังของบ่อน้ำเขย่าเบา ๆ เพื่อผสม
3. การฟักตัว: ปิดผนึกจานด้วยฟิล์มปิดผนึกและฟักตัวที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 นาที
4. สารละลายผสม: เจือจาง 30 เท่า (20 เท่าของ 48t) ของเหลวที่เข้มข้นด้วยน้ำกลั่น 30 เท่า (20 เท่าของ 48t) จากนั้นใช้
5. การล้าง: ลอกฟิล์มปิดผนึกอย่างระมัดระวังทิ้งของเหลวหมุนแห้งเติมเต็มแต่ละหลุมด้วยสารละลายล้างปล่อยให้มันยืนเป็นเวลา 30 วินาทีและทิ้งทำซ้ำ 5 ครั้งและตบแห้ง
6. เพิ่มเอนไซม์: เพิ่มรีเอเจนต์ฉลากเอนไซม์50μlให้กับแต่ละหลุมยกเว้นว่างเปล่า
7. การบ่ม: การดำเนินการเหมือนกับ 3
8. การซัก: การดำเนินการเหมือนกับ 5

9. การพัฒนาสี: เพิ่ม50μlของนักพัฒนา A ลงในแต่ละหลุมแล้วเพิ่ม50μlของนักพัฒนา B, ผสมเบา ๆ และแสดงที่ 37 ℃เป็นเวลา 15 นาทีในที่มืด
10. การเลิกจ้าง: เพิ่มโซลูชันหยุด50μLให้กับแต่ละหลุมเพื่อหยุดปฏิกิริยา (ในเวลานี้สีน้ำเงินจะเปลี่ยนเป็นสีเหลือง)
11. ความมุ่งมั่น: วัดค่าการดูดซับ (ค่า OD) ของแต่ละหลุมตามลำดับด้วยเครื่องปรับอากาศที่ว่างเปล่าที่ศูนย์และความยาวคลื่น 450 นาโนเมตร การวัดควรดำเนินการภายใน 15 นาทีหลังจากเพิ่มโซลูชันสุดท้าย
ข้อควรระวัง:
1. ชุดควรปรับสมดุลที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15-30 นาทีก่อนที่จะถูกนำออกจากสภาพแวดล้อมในตู้เย็น หากแผ่นเคลือบฉลากเอนไซม์ไม่ได้เปิดแถบควรเก็บไว้ในถุงปิดผนึก
2. ผลึกอาจตกตะกอนในของเหลวซักเข้มข้นซึ่งสามารถให้ความร้อนและละลายในอ่างน้ำในระหว่างการเจือจางและผลลัพธ์จะไม่ได้รับผลกระทบในระหว่างการซัก
3. ตัวอย่างควรใช้ในแต่ละขั้นตอนของการเพิ่มตัวอย่างและความแม่นยำควรได้รับการตรวจสอบเป็นประจำเพื่อหลีกเลี่ยงข้อผิดพลาดในการทดสอบ เป็นการดีที่สุดที่จะควบคุมเวลาการสุ่มตัวอย่างภายใน 5 นาที หากมีตัวอย่างมากมายขอแนะนำให้ใช้ปืนวอลเลย์เพื่อเพิ่มตัวอย่าง

4. โปรดสร้างเส้นโค้งมาตรฐานในเวลาเดียวกันของการวัดแต่ละครั้งมันเป็นการดีที่สุดที่จะสร้างรูสองครั้ง หากเนื้อหาของสารที่จะทดสอบในชิ้นงานจะสูงเกินไป (ค่า OD ของตัวอย่างมากกว่าค่า OD ของหลุมแรกของบ่อมาตรฐาน) โปรดเจือจางด้วยหลายครั้ง (N ครั้ง) ตัวอย่างเจือจางแล้วพิจารณา หลาย (× N × 5)
5. ฟิล์มปิดผนึกถูก จำกัด เพียงการใช้ครั้งเดียวเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้าม
6. โปรดเก็บสารตั้งต้นให้ห่างจากแสง
7. ทำตามคำแนะนำอย่างเคร่งครัดและผลการทดสอบจะต้องถูกกำหนดโดยเครื่องอ่านไมโครเพลท
8. ตัวอย่างทั้งหมดการล้างของเหลวและของเสียต่าง ๆ ควรได้รับการปฏิบัติในฐานะตัวแทนติดเชื้อ
9. ส่วนประกอบของแบทช์ที่แตกต่างกันของน้ำยานี้จะไม่ถูกผสม
10. หากมีความแตกต่างใด ๆ กับคู่มือภาษาอังกฤษคู่มือภาษาอังกฤษจะต้องเหนือกว่า
การคำนวณ:
การใช้ความเข้มข้นของมาตรฐานเป็น abscissa และค่า OD เป็น ordinate วาดเส้นโค้งมาตรฐานบนกระดาษพิกัดและค้นหาความเข้มข้นที่สอดคล้องกันจากเส้นโค้งมาตรฐานตามค่า OD ของตัวอย่าง; จากนั้นคูณด้วยปัจจัยการเจือจาง; คำนวณสมการการถดถอยเชิงเส้นของเส้นโค้งมาตรฐานด้วยค่า OD แทนที่ค่า OD ของตัวอย่างลงในสมการคำนวณความเข้มข้นของตัวอย่างและคูณด้วยปัจจัยการเจือจางเพื่อให้ได้ความเข้มข้นที่แท้จริงของตัวอย่าง

(ภาพนี้มีไว้สำหรับการอ้างอิงเท่านั้น)

Performance KIT:
1. ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ R ระหว่างการถดถอยเชิงเส้นของตัวอย่างและความเข้มข้นที่คาดหวังมากกว่า 0.990
2. ชุดและการอนุมัติจะน้อยกว่า 9% และ 11% ตามลำดับ
ช่วงการสอบ:
1pg / ml -45pg / ml
เงื่อนไขการจัดเก็บและระยะเวลาความถูกต้อง:
1. เก็บชุด: 2-8 ℃
2. ความถูกต้อง: 6 เดือน