Porcine β-human chorionic gonadotropin (β-HCG) คู่มือการใช้งานชุดคำแนะนำชุด Immunoassay ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ชุดนี้ใช้สำหรับการใช้งานวิจัยเท่านั้น
ชื่อยา:
ชื่อสามัญ: Porcine Beta Human Chorionic Gonadotropin (β-HCG) ELISA KIT
จุดประสงค์ของการใช้งาน:
ชุดนี้ใช้สำหรับการกำหนดβ-human chorionic gonadotropin (β-HCG) ในซีรั่มหมูพลาสมาและตัวอย่างของเหลวที่เกี่ยวข้อง
หลักการทดลอง:
ชุดนี้ใช้วิธีแซนวิชแอนติบอดีคู่เพื่อกำหนดระดับของหมูβ-human chorionic gonadotropin (β-HCG) ในตัวอย่าง แผ่นจุลภาคถูกเคลือบด้วยเม่นที่บริสุทธิ์β-human chorionic gonadotropin (β-HCG) แอนติบอดีเพื่อสร้างแอนติบอดีเฟสของแข็ง Porcine β-human chorionic gonadotropin (β- HCG) จากนั้นรวมกับแอนติบอดีที่ติดฉลากของมนุษย์ HRP เพื่อสร้างแอนติบอดีแอนติบอดีแอนติบอดี้ เพิ่มสำหรับการพัฒนาสี TMB ถูกแปลงเป็นสีน้ำเงินภายใต้การเร่งปฏิกิริยาของเอนไซม์ HRP และเป็นสีเหลืองสุดท้ายภายใต้การกระทำของกรด ความลึกของสีมีความสัมพันธ์เชิงบวกกับมนุษย์ gonadotropin β (β-HCG) ในตัวอย่าง การดูดกลืนแสง (ค่า OD) ถูกวัดด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลทที่ความยาวคลื่น 450 นาโนเมตรและความเข้มข้นของสุกรβ-human chorionic gonadotropin (β-HCG) ในตัวอย่างถูกคำนวณโดยเส้นโค้งมาตรฐาน
องค์ประกอบชุด:
1 20 เท่าการซักผ้าแบบเข้มข้น 30ml × 1 ขวด 7 หยุดสารละลาย 6ml × 1 ขวด
2 เอนไซม์ฉลากรีเอเจนต์ 6ml × 1 ขวด 8 มาตรฐาน (270μg / l) 0.5ml × 1 ขวด
แผ่นเคลือบเอนไซม์ 3 แผ่นแผ่นเคลือบ 12 หลุม× 8 แถบ 9 การเจือจางมาตรฐาน 1.5ml × 1 ขวด
4 ตัวอย่างเจือจาง 6ml × 1 ขวด 10 คำแนะนำ 1 สำเนา
5 นักพัฒนาโซลูชัน 6ml × 1 ขวด 11 2 ฟิล์มปิดผนึก
6 นักพัฒนา B ของเหลว 6ml × 1 / ขวด 12 ถุงปิดผนึก 1
ความต้องการตัวอย่าง:
1. ตัวอย่างจะถูกสกัดโดยเร็วที่สุดหลังจากการรวบรวมและทำการสกัดตามวรรณกรรมที่เกี่ยวข้องและควรทำการทดลองโดยเร็วที่สุดหลังจากการสกัด หากการทดสอบไม่สามารถทำได้ทันทีตัวอย่างสามารถเก็บไว้ที่ -20 ℃ แต่ควรหลีกเลี่ยงการแช่แข็งซ้ำ ๆ และการละลาย
2. ตัวอย่างที่มี NAN3 ไม่สามารถตรวจพบได้เนื่องจาก NAN3 ยับยั้งกิจกรรม Horseradish peroxidase (HRP)
ขั้นตอน:
1. การเจือจางและการโหลดผลิตภัณฑ์มาตรฐาน: ตั้งค่า 10 หลุมมาตรฐานบนแผ่นเคลือบเอนไซม์เพิ่ม 100 μlของผลิตภัณฑ์มาตรฐานในหลุมแรกและที่สองจากนั้นเพิ่มผลิตภัณฑ์มาตรฐานในหลุมแรกและที่สอง 50μlของ diluent ผสมให้เข้ากัน; จากนั้นใช้100μlจากบ่อน้ำแรกและบ่อน้ำที่สองและเพิ่มลงในหลุมที่สามและสี่ตามลำดับจากนั้นเพิ่มสารละลายเจือจางมาตรฐาน50μLลงในหลุมที่สามและสี่ตามลำดับ และทิ้งไว้แล้วเพิ่ม50μlแต่ละอันลงในหลุมที่ห้าและหกจากนั้นเพิ่ม 50UL ของสารละลายเจือจางมาตรฐานลงในหลุมที่ห้าและหกตามลำดับและผสมให้เข้ากัน หลังจากผสมให้ใช้เวลา50μlจากหลุมที่ห้าและหกและเพิ่มเข้าไปในหลุมที่เจ็ดและแปดตามลำดับ จากนั้นเพิ่มสารละลายเจือจางมาตรฐาน50μLลงในหลุมที่เจ็ดและแปดตามลำดับ ใช้เวลา50μlจากแปดหลุมและเพิ่มลงในหลุมที่เก้าและสิบ จากนั้นเพิ่ม50μLของสารละลายเจือจางมาตรฐานให้กับหลุมที่เก้าและสิบตามลำดับ หลังจากผสมให้ใช้เวลา50μlจากหลุมที่เก้าและสิบและทิ้ง (หลังจากเจือจางปริมาตรของแต่ละหลุมคือ50μlและความเข้มข้นคือ180μg / L, 120μg / L, 60μg / L, 30μg / L, 15μg / L)
2. เพิ่มตัวอย่าง: ตั้งค่าหลุมว่างเปล่า (หลุมควบคุมเปล่าไม่เพิ่มตัวอย่างและรีเอเจนต์เอนไซม์ส่วนที่เหลือของขั้นตอนเดียวกัน) และหลุมตัวอย่างที่จะทดสอบ เพิ่มตัวอย่าง40μLของตัวอย่างการทดสอบที่ดีของแผ่นเคลือบเอนไซม์จากนั้นเพิ่มตัวอย่างทดสอบ10μL (การเจือจางสุดท้ายของตัวอย่างคือ 5 ครั้ง) เพิ่มตัวอย่างและเพิ่มตัวอย่างที่ด้านล่างของบ่อน้ำของไมโครเพลทพยายามอย่าแตะต้องผนังของบ่อน้ำเขย่าเบา ๆ เพื่อผสม
3. การฟักตัว: ปิดผนึกจานด้วยฟิล์มปิดผนึกและฟักตัวที่ 37 ° C เป็นเวลา 30 นาที
4. สารละลายผสม: เจือจางของเหลวล้างความเข้มข้น 20 เท่าด้วยน้ำกลั่น 20 เท่าและสำรอง
5. การล้าง: ลอกฟิล์มปิดผนึกอย่างระมัดระวังทิ้งของเหลวหมุนแห้งเติมเต็มแต่ละหลุมด้วยสารละลายล้างปล่อยให้มันยืนเป็นเวลา 30 วินาทีและทิ้งทำซ้ำ 5 ครั้งและตบแห้ง
6. เพิ่มเอนไซม์: เพิ่มรีเอเจนต์ฉลากเอนไซม์50μlให้กับแต่ละหลุมยกเว้นว่างเปล่า
7. การบ่ม: การดำเนินการเหมือนกับ 3
8. การซัก: การดำเนินการเหมือนกับ 5
9. การพัฒนาสี: เพิ่ม50μlของนักพัฒนา A ลงในแต่ละหลุมแล้วเพิ่ม50μlของนักพัฒนา B, ผสมเบา ๆ และพัฒนาสีที่ 37 ℃ในที่มืด
15 นาที.
10. การเลิกจ้าง: เพิ่มโซลูชันหยุด50μLให้กับแต่ละหลุมเพื่อหยุดปฏิกิริยา (ในเวลานี้สีน้ำเงินจะเปลี่ยนเป็นสีเหลือง)
11. ความมุ่งมั่น: วัดค่าการดูดซับ (ค่า OD) ของแต่ละหลุมตามลำดับด้วยเครื่องปรับอากาศที่ว่างเปล่าที่ศูนย์และความยาวคลื่น 450 นาโนเมตร การวัดควรดำเนินการภายใน 15 นาทีหลังจากเพิ่มโซลูชันหยุด
การคำนวณ:
การใช้ความเข้มข้นของมาตรฐานเป็น abscissa และค่า OD เป็น ordinate วาดเส้นโค้งมาตรฐานบนกระดาษพิกัดและค้นหาความเข้มข้นที่สอดคล้องกันจากเส้นโค้งมาตรฐานตามค่า OD ของตัวอย่าง; ทวีคูณด้วยปัจจัยการเจือจาง; หรือใช้ความเข้มข้นของมาตรฐานคำนวณสมการการถดถอยเชิงเส้นของเส้นโค้งมาตรฐานด้วยค่า OD แทนที่ค่า OD ของตัวอย่างลงในสมการคำนวณความเข้มข้นของตัวอย่างและคูณด้วยปัจจัยการเจือจางเพื่อให้ได้ความเข้มข้นที่แท้จริงของความเข้มข้นของความเข้มข้นของ ตัวอย่าง.
ข้อควรระวัง:
1. ชุดควรนำออกจากสภาพแวดล้อมในตู้เย็นและปรับสมดุลที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15-30 นาทีก่อนการใช้งาน หากแผ่นเคลือบเอนไซม์ถูกเปิดผนึกหลังจากเปิดตัวแถบควรถูกเก็บไว้ในถุงปิดผนึก
2. ผลึกอาจตกตะกอนในของเหลวซักเข้มข้นซึ่งสามารถให้ความร้อนและละลายในอ่างน้ำในระหว่างการเจือจางและผลลัพธ์จะไม่ได้รับผลกระทบในระหว่างการซัก
3. ตัวอย่างควรใช้ในแต่ละขั้นตอนของการเพิ่มตัวอย่างและความแม่นยำควรได้รับการตรวจสอบเป็นประจำเพื่อหลีกเลี่ยงข้อผิดพลาดในการทดสอบ เป็นการดีที่สุดที่จะควบคุมเวลาการสุ่มตัวอย่างภายใน 5 นาที หากมีตัวอย่างมากมายขอแนะนำให้ใช้ปืนวอลเลย์เพื่อเพิ่มตัวอย่าง
4. โปรดสร้างเส้นโค้งมาตรฐานในเวลาเดียวกันของการวัดแต่ละครั้งมันเป็นการดีที่สุดที่จะสร้างรูสองครั้ง หากเนื้อหาของสารที่จะทดสอบในชิ้นงานจะสูงเกินไป (ค่า OD ของตัวอย่างมากกว่าค่า OD ของหลุมแรกของบ่อมาตรฐาน) โปรดเจือจางด้วยหลายครั้ง (N ครั้ง) ตัวอย่างเจือจางแล้วพิจารณา หลาย (× N × 5)
5. ฟิล์มปิดผนึกถูก จำกัด เพียงการใช้ครั้งเดียวเพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้าม
6. โปรดเก็บสารตั้งต้นให้ห่างจากแสง
7. ทำตามคำแนะนำอย่างเคร่งครัดและผลการทดสอบจะต้องถูกกำหนดโดยเครื่องอ่านไมโครเพลท
8. ตัวอย่างทั้งหมดการล้างของเหลวและของเสียต่าง ๆ ควรได้รับการปฏิบัติในฐานะตัวแทนติดเชื้อ
9. ส่วนประกอบของแบทช์ที่แตกต่างกันของน้ำยานี้จะไม่ถูกผสม
10. หากมีความแตกต่างใด ๆ กับคู่มือภาษาอังกฤษคู่มือภาษาอังกฤษจะต้องเหนือกว่า
ช่วงการสอบ:
10μg / l -200μg / l
ข้อมูลจำเพาะ:
96 เงื่อนไขการให้บริการ / กล่องเก็บของและวันหมดอายุ
1. การจัดเก็บคิท:; 2-8 ℃
2. ความถูกต้อง: 6 เดือน