ELISA kháng thể kháng HCG của con người (HCG-IGA)
Hướng dẫn sử dụng bộ thử nghiệm này chỉ dành cho nghiên cứu sử dụng
Mục đích: Bộ này được sử dụng để xác định hàm lượng IgA kháng thể kháng HCG (HCG-IGA) trong huyết thanh người, huyết tương và các mẫu chất lỏng liên quan.
Nguyên tắc thử nghiệm:
Bộ này sử dụng phương pháp bánh sandwich kháng thể kép để xác định mức độ IgA kháng thể kháng HCG của con người (HCG-IGA) trong mẫu vật. Các tấm micropious được phủ kháng thể kháng thể kháng HCG của con người tinh khiết (HCG-IGA) để điều chế các kháng thể pha rắn. IgA kháng thể kháng HCG (HCG-IGA) đã được thêm vào các microwell được phủ mAb lần lượt, và sau đó được dán nhãn HRP, kháng thể kháng GOAT liên kết với nhau để tạo thành một phức hợp kháng thể kháng kháng thể kháng thể kháng thể. Sau khi rửa kỹ, chất nền TMB được thêm vào để phát triển màu. TMB được chuyển đổi thành màu xanh dưới sự xúc tác của enzyme HRP, và thành màu vàng cuối cùng dưới tác dụng của axit. Độ sâu màu tương quan dương với IgA kháng thể kháng HCG (HCG-IGA) trong mẫu. Độ hấp thụ (giá trị OD) được đo bằng đầu đọc vi bản ở bước sóng 450nm và nồng độ IgA kháng thể kháng HCG của con người (HCG-IGA) trong mẫu được tính bằng đường cong tiêu chuẩn.
Thành phần bộ dụng cụ:
KIT THÀNH PHẦN 48 Cấu hình tốt 96 Hướng dẫn lưu trữ cấu hình tốt 1 Phần 1 Phần Niêm phong Phim 2 mảnh (48) 2 mảnh (96)
Một túi niêm phong và một tấm lớp phủ có nhãn enzyme 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃ Tiêu chuẩn được bảo quản: 54pg / ml 0,5ml × 1 chai 0,5ml × 1 tiêu chuẩn được bảo quản 1,5ml × 2-8 ℃ × 1 ML × 1 chai thuốc thử được dán nhãn enzyme được lưu trữ ở 2-8 ℃ 3 ml × 1 chai 6 ml × 1 chai chất pha loãng mẫu ở 2-8 ℃ 3 ml × 1 chai 6 ml × 1 chai lưu trữ màu ở 2 -8 ℃ Thuốc thử Một dung dịch 3 ml × 1 chai 6 ml × 1 chai 2-8 ° C Nhà phát triển lưu trữ b Giải pháp 3 ml × 1 chai 6 ml Chai 2- Lưu trữ dung dịch rửa cô đặc ở 8 (20ml × 20 lần) × 1 chai (20ml × 30 lần) × 1 chai ở 2-8 ℃
1. Huyết thanh: Máu nhiệt độ phòng đông lại tự nhiên trong 10-20 phút, ly tâm trong khoảng 20 phút (2000-3000 vòng / phút). Thu thập phần nổi phía trên cẩn thận và ly tâm một lần nữa nếu kết tủa xuất hiện trong quá trình lưu trữ.
2. Plasma: EDTA hoặc natri citrate nên được chọn làm thuốc chống đông máu theo yêu cầu của mẫu vật, trộn trong 10-20 phút và ly tâm trong khoảng 20 phút (2000-3000 vòng / phút). Thu thập các chất nổi trội cẩn thận. Nếu một hình thức kết tủa trong quá trình lưu trữ, nó nên được ly tâm một lần nữa.
3. Nước tiểu: Được thu thập trong các ống vô trùng và ly tâm trong khoảng 20 phút (2000-3000 vòng / phút). Thu thập các chất nổi trội cẩn thận. Nếu một hình thức kết tủa trong quá trình lưu trữ, hãy ly tâm một lần nữa. Vùng phổi và cổ trướng, thực hiện tham chiếu dịch não tủy.
4. Nuôi cấy tế bào Chất nổi trên bề mặt: Khi phát hiện các thành phần được tiết ra, thu thập bằng một ống vô trùng. Máy ly tâm trong khoảng 20 phút (2000-3000 vòng / phút). Thu thập các chất nổi trội cẩn thận. Khi phát hiện các thành phần bên trong các tế bào, pha loãng huyền phù tế bào bằng PBS (PH7.2-7.4) và nồng độ tế bào sẽ đạt khoảng 1 triệu / mL. Thông qua việc đóng băng và tan băng lặp đi lặp lại, các tế bào bị phá hủy và các thành phần nội bào được giải phóng. Máy ly tâm trong khoảng 20 phút (2000-3000 vòng / phút). Thu thập các chất nổi trội cẩn thận. Nếu một hình thức kết tủa trong quá trình lưu trữ, nó nên được ly tâm một lần nữa.
5. Tổ chức mẫu vật: Sau khi cắt mẫu vật, cân nó. Thêm một lượng PBS nhất định, PH7.4. Nhanh chóng đóng băng và tiết kiệm với nitơ lỏng để sử dụng sau này. Sau khi mẫu vật tan chảy, nó vẫn duy trì nhiệt độ 2-8 ° C. Thêm một lượng PBS nhất định (PH7.4) và đồng nhất hóa mẫu vật bằng thủ công hoặc đồng nhất. Máy ly tâm trong khoảng 20 phút (2000-3000 vòng / phút). Thu thập các chất nổi trội cẩn thận. Sau khi phân phối, một phần sẽ được kiểm tra và phần còn lại bị đóng băng để sử dụng trong tương lai.
6. Mẫu vật nên được trích xuất càng sớm càng tốt sau khi thu thập. Việc khai thác nên được thực hiện theo tài liệu liên quan. Thí nghiệm nên được thực hiện càng sớm càng tốt sau khi chiết xuất. Nếu thử nghiệm không thể được thực hiện ngay lập tức, mẫu vật có thể được lưu trữ ở mức -20, nhưng nên tránh đóng băng và tan băng lặp đi lặp lại.
7. Mẫu chứa NAN3 không thể được phát hiện vì NAN3 ức chế hoạt động của horseradish peroxidase (HRP).
Các bước:
1. Pha loãng và tải các sản phẩm tiêu chuẩn: Đặt 10 giếng tiêu chuẩn trên tấm phủ enzyme, thêm 100 μL các sản phẩm tiêu chuẩn vào giếng thứ nhất và thứ hai, sau đó thêm các sản phẩm tiêu chuẩn vào giếng thứ nhất và thứ hai. 50μl chất pha loãng, trộn đều; Sau đó lấy 100μl từ giếng đầu tiên và giếng thứ hai và thêm chúng vào các giếng thứ ba và thứ tư tương ứng, sau đó thêm 50μl dung dịch pha loãng tiêu chuẩn vào các giếng thứ ba và thứ tư tương ứng, trộn giếng sau đó lấy 50μL mỗi giếng thứ ba và thứ tư và loại bỏ nó, sau đó thêm 50μl mỗi giếng vào thứ năm và thứ sáu, sau đó thêm 50ul giải pháp pha loãng tiêu chuẩn vào các giếng thứ năm và thứ sáu tương ứng, và trộn giếng; Sau khi trộn, lấy 50μl từ giếng thứ năm và thứ sáu và thêm chúng vào các giếng thứ bảy và thứ tám tương ứng. Sau đó thêm 50μl dung dịch pha loãng tiêu chuẩn vào các giếng thứ bảy và thứ tám tương ứng. Lấy 50μl từ tám giếng và thêm chúng vào giếng thứ chín và thứ mười. Sau đó thêm 50μl dung dịch pha loãng tiêu chuẩn vào giếng thứ chín và thứ mười tương ứng. Sau khi trộn, lấy 50μl từ giếng thứ chín và thứ mười và loại bỏ. .
2. Thêm mẫu: Thiết lập các giếng trống (các giếng điều khiển trống không thêm mẫu và thuốc thử enzyme, phần còn lại của các bước là như nhau) và các giếng mẫu được kiểm tra. Thêm 40μl chất pha loãng mẫu vào giếng mẫu thử của tấm phủ enzyme, sau đó thêm 10μl mẫu thử (độ pha loãng cuối cùng của mẫu là 5 lần). Thêm mẫu và thêm mẫu vào đáy giếng của microplate, cố gắng không chạm vào tường của giếng, lắc nhẹ để trộn.
3. ủ: niêm phong tấm bằng màng niêm phong và ủ ở 37 ° C trong 30 phút.
4. Dung dịch trộn: Pha loãng 30 lần (20 lần 48T) chất lỏng rửa cô đặc với nước cất 30 lần (20 lần 48T) và sau đó sử dụng.
5. Rửa: cẩn thận lột màng niêm phong, loại bỏ chất lỏng, spin khô, lấp đầy từng giếng bằng dung dịch rửa, để nó đứng trong 30 giây và loại bỏ, lặp lại 5 lần và vỗ khô.
6. Thêm enzyme: Thêm 50μl thuốc thử nhãn enzyme vào mỗi giếng, ngoại trừ giếng trống.
7. ủ: Hoạt động giống như 3.
8. Rửa: Hoạt động giống như 5.
9.
10. Chấm dứt: Thêm 50μl dung dịch dừng cho mỗi giếng để dừng phản ứng (tại thời điểm này màu xanh sẽ chuyển sang màu vàng).
11. Xác định: Đo độ hấp thụ (giá trị OD) của từng giếng theo trình tự với máy điều hòa không khí trống ở bước sóng 0 và 450nm. Việc đo nên được thực hiện trong vòng 15 phút sau khi thêm giải pháp cuối cùng.
Các biện pháp phòng ngừa:
1. Bộ dụng cụ phải được cân bằng ở nhiệt độ phòng trong 15-30 phút trước khi được đưa ra khỏi môi trường lạnh. Nếu tấm phủ nhãn enzyme chưa mở, dải nên được lưu trữ trong một túi kín.
2. Tinh thể có thể được kết tủa trong chất lỏng rửa cô đặc, có thể được làm nóng và hòa tan trong bể nước trong quá trình pha loãng, và kết quả sẽ không bị ảnh hưởng trong quá trình rửa.
3. Bộ lấy mẫu nên được sử dụng ở mỗi bước bổ sung mẫu và độ chính xác nên được kiểm tra thường xuyên để tránh các lỗi kiểm tra. Tốt nhất là kiểm soát thời gian lấy mẫu trong vòng 5 phút. Nếu có nhiều mẫu vật, nên sử dụng súng bóng chuyền để thêm mẫu.
4. Vui lòng tạo một đường cong tiêu chuẩn cùng lúc của mỗi lần đo, tốt nhất là tạo một lỗ đôi. Nếu nội dung của chất được kiểm tra trong mẫu vật quá cao (giá trị OD của mẫu lớn hơn giá trị OD của giếng đầu tiên của giếng tiêu chuẩn), vui lòng pha loãng nó với một số lần (n lần) nhất định của Các chất pha loãng mẫu và sau đó xác định nó. Nhiều (× N × 5).
5. Phim niêm phong được giới hạn trong việc sử dụng một lần để tránh nhiễm chéo.
6. Vui lòng giữ chất nền khỏi ánh sáng.
7. Theo dõi nghiêm ngặt các hướng dẫn và kết quả kiểm tra phải được xác định bởi đầu đọc vi bản.
8. Tất cả các mẫu, rửa chất lỏng và chất thải khác nhau nên được coi là tác nhân truyền nhiễm.
9. Các thành phần của các lô khác nhau của thuốc thử này không được trộn lẫn.
10. Nếu có bất kỳ sự khác biệt nào với hướng dẫn tiếng Anh, hướng dẫn tiếng Anh sẽ thắng thế.
Phép tính:
Lấy nồng độ của tiêu chuẩn là abscissa và giá trị OD làm thứ tự, vẽ một đường cong tiêu chuẩn trên giấy tọa độ và tìm nồng độ tương ứng từ đường cong tiêu chuẩn theo giá trị OD của mẫu; sau đó nhân với yếu tố pha loãng; Tính phương trình hồi quy tuyến tính của đường cong tiêu chuẩn bằng giá trị OD, thay thế giá trị OD của mẫu vào phương trình, tính toán nồng độ mẫu và nhân nó với hệ số pha loãng để thu được nồng độ thực tế của mẫu.
(Hình ảnh này chỉ để tham khảo)
Hiệu suất bộ dụng cụ:
1. Hệ số tương quan r giữa hồi quy tuyến tính của mẫu và nồng độ dự kiến là hơn 0,990.
2. Batch và phê duyệt sẽ tương ứng dưới 9% và 11%
Phạm vi kiểm tra:
1pg / ml -45pg / ml
Điều kiện lưu trữ và thời gian hợp lệ:
1. Lưu trữ bộ dụng cụ: 2-8.
2. Hiệu lực: 6 tháng