Porcine β-Human chorionic gonadotropin (β-HCG) enzyme liên kết với hướng dẫn hướng dẫn sử dụng bộ dụng cụ tiêu mô liên kết với bộ dụng cụ này chỉ dành cho nghiên cứu.
Tên ma túy:
Tên chung: Porcine Beta Human Chorionic Gonadotropin (β-HCG) ELISA Kit
Mục đích sử dụng:
Bộ này được sử dụng để xác định gonadotropin chorionic (--HCG) trong huyết thanh lợn, huyết tương và các mẫu chất lỏng liên quan.
Nguyên tắc thử nghiệm:
Bộ này sử dụng phương pháp bánh sandwich kháng thể kép để xác định mức độ của porcine-người chorionic gonadotropin (--HCG) trong mẫu vật. Các tấm micropious được phủ bằng kháng thể gonadotropin (-HCG) của porcine porcine để tạo ra các kháng thể pha rắn. Gonadotropin choripin (β- HCG), sau đó kết hợp với kháng thể virtropin (β-HCG) kháng thể HRP (β-HCG) để tạo thành một phức hợp kháng thể kháng thể kháng thể kháng kháng thể. được thêm vào để phát triển màu sắc. TMB được chuyển đổi thành màu xanh dưới sự xúc tác của enzyme HRP, và thành màu vàng cuối cùng dưới tác dụng của axit. Độ sâu màu có mối tương quan dương với gonadotropin villotropin của con người (β-HCG) trong mẫu. Độ hấp thụ (giá trị OD) được đo bằng đầu đọc vi bản ở bước sóng 450nm và nồng độ gonadotropin choorionic porcine-người (--HCG) trong mẫu được tính bằng đường cong tiêu chuẩn.
Thành phần bộ dụng cụ:
1 20 lần dung dịch rửa cô đặc 30ml × 1 Chai 7 Dung dịch 6ml × 1 chai
2 Thuốc thử nhãn enzyme 6ml × 1 Chai 8 tiêu chuẩn (270μg / L) 0,5ml × 1 chai
3 Nhãn enzyme tấm phủ 12 giếng × 8 dải 9 pha loãng tiêu chuẩn 1.5ml × 1 chai
4 Mẫu chất pha loãng 6ml × 1 chai 10 Hướng dẫn 1 bản sao
5 Nhà phát triển Giải pháp 6ml × 1 Chai 11 2 Phim niêm phong
6 Nhà phát triển B Liquid 6ml × 1 / Chai 12 Túi niêm phong 1
Yêu cầu mẫu vật:
1. Mẫu vật được chiết xuất càng sớm càng tốt sau khi thu thập và trích xuất được thực hiện theo tài liệu liên quan và các thí nghiệm nên được tiến hành càng sớm càng tốt sau khi trích xuất. Nếu bài kiểm tra không thể được thực hiện ngay lập tức, mẫu vật có thể được lưu trữ ở mức -20, nhưng nên tránh bị đóng băng và tan băng lặp đi lặp lại
2. Các mẫu chứa NAN3 không thể được phát hiện vì NAN3 ức chế hoạt động của cải ngựa peroxidase (HRP).
Các bước:
1. Pha loãng và tải các sản phẩm tiêu chuẩn: Đặt 10 giếng tiêu chuẩn trên tấm phủ enzyme, thêm 100 μL các sản phẩm tiêu chuẩn vào giếng thứ nhất và thứ hai, sau đó thêm các sản phẩm tiêu chuẩn vào giếng thứ nhất và thứ hai. 50μl chất pha loãng, trộn đều; Sau đó lấy 100μl từ giếng đầu tiên và giếng thứ hai và thêm chúng vào các giếng thứ ba và thứ tư tương ứng, sau đó thêm 50μl dung dịch pha loãng tiêu chuẩn vào các giếng thứ ba và thứ tư tương ứng, trộn giếng sau đó lấy 50μL mỗi giếng thứ ba và thứ tư và loại bỏ nó, sau đó thêm 50μl mỗi giếng vào thứ năm và thứ sáu, sau đó thêm 50ul giải pháp pha loãng tiêu chuẩn vào các giếng thứ năm và thứ sáu tương ứng, và trộn giếng; Sau khi trộn, lấy 50μl từ giếng thứ năm và thứ sáu và thêm chúng vào các giếng thứ bảy và thứ tám tương ứng. Sau đó thêm 50μl dung dịch pha loãng tiêu chuẩn vào các giếng thứ bảy và thứ tám tương ứng. Lấy 50μl từ tám giếng và thêm chúng vào giếng thứ chín và thứ mười. Sau đó thêm 50μl dung dịch pha loãng tiêu chuẩn vào giếng thứ chín và thứ mười tương ứng. Sau khi trộn, lấy 50μl từ giếng thứ chín và thứ mười và loại bỏ. .
2. Thêm mẫu: Thiết lập các giếng trống (các giếng điều khiển trống không thêm mẫu và thuốc thử enzyme, phần còn lại của các bước là như nhau) và các giếng mẫu được kiểm tra. Thêm 40μl chất pha loãng mẫu vào giếng mẫu thử của tấm phủ enzyme, sau đó thêm 10μl mẫu thử (độ pha loãng cuối cùng của mẫu là 5 lần). Thêm mẫu và thêm mẫu vào đáy giếng của microplate, cố gắng không chạm vào tường của giếng, lắc nhẹ để trộn.
3. ủ: niêm phong tấm bằng màng niêm phong và ủ ở 37 ° C trong 30 phút.
4. Dung dịch trộn: Pha loãng chất lỏng rửa cô đặc 20 lần với nước cất 20 lần và dự trữ
5. Rửa: cẩn thận lột màng niêm phong, loại bỏ chất lỏng, spin khô, lấp đầy từng giếng bằng dung dịch rửa, để nó đứng trong 30 giây và loại bỏ, lặp lại 5 lần và vỗ khô.
6. Thêm enzyme: Thêm 50μl thuốc thử nhãn enzyme vào mỗi giếng, ngoại trừ giếng trống.
7. ủ: Hoạt động giống như 3.
8. Rửa: Hoạt động giống như 5.
9. Phát triển màu: Thêm 50μl nhà phát triển A vào mỗi giếng, sau đó thêm 50μl nhà phát triển B, trộn nhẹ nhàng và phát triển màu
15 phút.
10. Chấm dứt: Thêm 50μl dung dịch dừng cho mỗi giếng để dừng phản ứng (tại thời điểm này màu xanh sẽ chuyển sang màu vàng).
11. Xác định: Đo độ hấp thụ (giá trị OD) của từng giếng theo trình tự với máy điều hòa không khí trống ở bước sóng 0 và 450nm. Việc đo nên được thực hiện trong vòng 15 phút sau khi thêm dung dịch dừng.
Phép tính:
Lấy nồng độ của tiêu chuẩn là abscissa và giá trị OD làm thứ tự, vẽ một đường cong tiêu chuẩn trên giấy tọa độ và tìm nồng độ tương ứng từ đường cong tiêu chuẩn theo giá trị OD của mẫu; nhân với yếu tố pha loãng; hoặc sử dụng nồng độ của tiêu chuẩn Tính phương trình hồi quy tuyến tính của đường cong tiêu chuẩn bằng giá trị OD, thay thế giá trị OD của mẫu vào phương trình, tính toán nồng độ mẫu và nhân nó bằng hệ số pha loãng để thu được nồng độ thực tế của mẫu.
Các biện pháp phòng ngừa:
1. Bộ dụng cụ nên được đưa ra khỏi môi trường lạnh và cân bằng ở nhiệt độ phòng trong 15-30 phút trước khi sử dụng. Nếu tấm phủ enzyme không được tiết lộ sau khi mở, dải nên được lưu trữ trong một túi kín.
2. Tinh thể có thể được kết tủa trong chất lỏng rửa cô đặc, có thể được làm nóng và hòa tan trong bể nước trong quá trình pha loãng, và kết quả sẽ không bị ảnh hưởng trong quá trình rửa.
3. Bộ lấy mẫu nên được sử dụng ở mỗi bước bổ sung mẫu và độ chính xác nên được kiểm tra thường xuyên để tránh các lỗi kiểm tra. Tốt nhất là kiểm soát thời gian lấy mẫu trong vòng 5 phút. Nếu có nhiều mẫu vật, nên sử dụng súng bóng chuyền để thêm mẫu.
4. Vui lòng tạo một đường cong tiêu chuẩn cùng lúc của mỗi lần đo, tốt nhất là tạo một lỗ đôi. Nếu nội dung của chất được kiểm tra trong mẫu vật quá cao (giá trị OD của mẫu lớn hơn giá trị OD của giếng đầu tiên của giếng tiêu chuẩn), vui lòng pha loãng nó với một số lần (n lần) nhất định của Các chất pha loãng mẫu và sau đó xác định nó. Nhiều (× N × 5).
5. Phim niêm phong được giới hạn trong việc sử dụng một lần để tránh nhiễm chéo.
6. Vui lòng giữ chất nền khỏi ánh sáng.
7. Theo dõi nghiêm ngặt các hướng dẫn và kết quả kiểm tra phải được xác định bởi đầu đọc vi bản.
8. Tất cả các mẫu, rửa chất lỏng và chất thải khác nhau nên được coi là tác nhân truyền nhiễm.
9. Các thành phần của các lô khác nhau của thuốc thử này không được trộn lẫn.
10. Nếu có bất kỳ sự khác biệt nào với hướng dẫn tiếng Anh, hướng dẫn tiếng Anh sẽ thắng thế.
Phạm vi kiểm tra:
10μg / L -200μg / L
sự chỉ rõ:
96 phần / điều kiện lưu trữ hộp và ngày hết hạn
1. Bộ lưu trữ bộ:; 2-8.
2. Hiệu lực: 6 tháng