Anticorps anti-HCG humain IgA (HCG-IGA) ELISA
Instructions du kit pour une utilisation Ce réactif est pour la recherche uniquement
Objectif: Ce kit est utilisé pour déterminer la teneur en IgA anticorps anti-HCG (HCG-IGA) dans le sérum humain, le plasma et les échantillons de liquide associés.
Principe expérimental:
Ce kit utilise la méthode sandwich à double anticorps pour déterminer le niveau d'IgA anticorps anti-HCG humain (HCG-IGA) dans l'échantillon. Les plaques microporeuses ont été recouvertes d'anticorps IgA (HCG-IGA) purifiés pour les anticorps IgA (HCG-IGA) pour préparer les anticorps en phase solide. L'anticorps anti-HCG IgA (HCG-IGA) a été ajouté aux micro-elles recouverts de mAb, puis marqués avec HRP, l'anticorps anti-humain de chèvre se lie à un complexe d'anticorps anticorps anticorps-enzyme marqué. Après un lavage complet, le TMB du substrat est ajouté pour le développement des couleurs. Le TMB est converti en bleu sous la catalyse de l'enzyme HRP et en jaune final sous l'action de l'acide. La profondeur de couleur est positivement corrélée avec l'anticorps anti-HCG IgA (HCG-IGA) dans l'échantillon. L'absorbance (valeur OD) a été mesurée avec un lecteur de microplaques à une longueur d'onde de 450 nm, et la concentration d'IgA anticorps anti-HCG humaine (HCG-IGA) dans l'échantillon a été calculée par une courbe standard.
Composition du kit:
Composition du kit 48 Configuration de puits 96 Instructions de stockage de configuration de puits 1 Partie 1 Pièce Film de plaque d'étanchéité 2 pièces (48) 2 pièces (96)
Un sac scellé et une plaque de revêtement marquée enzymatique 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃ Standard conservé: 54pg / ml 0,5 ml × 1 bouteille 0,5 ml × 1 Dilluant standard préservé 1,5 ml × 2-8 ℃ × 1 bouteille de 1,5 ML × 1 bouteille de réactifs marqués enzymatiques stockés à 2-8 ℃ 3 ml × 1 bouteille de 6 ml × 1 bouteilles de diluant d'échantillon à 2-8 ℃ 3 ml × 1 bouteille de 6 ml × 1 bouteilles de stockage de couleurs à 2 -8 ℃ Réactif Une solution 3 ml × 1 bouteille 6 ml × 1 bouteille 2-8 ° C Développeur de stockage B Solution 3 ml × 1 bouteille 6 ml × 1 bouteille 2-8 ° C Solution d'arrêt de rangement 3 ml × 1 bouteille 6 ml × 1 bouteille 2- Stockez la solution de lavage concentrée à 8 ℃ (20 ml × 20 fois) × 1 bouteille (20 ml × 30 fois) × 1 bouteille à 2-8 ℃
1. Sérum: Le sang à température ambiante coagule naturellement pendant 10 à 20 minutes, centrifugé pendant environ 20 minutes (2000-3000 tr / min). Récupérez soigneusement le surnageant et centrifugez à nouveau si un précipité apparaît pendant le stockage.
2. Plasma: l'EDTA ou le citrate de sodium doit être sélectionné comme anticoagulant en fonction des exigences de l'échantillon, mélangés pendant 10 à 20 minutes et centrifugé pendant environ 20 minutes (2000-3000 tr / min). Collectez soigneusement le surnageant. Si un précipité se forme pendant le stockage, il doit être à nouveau centrifugé.
3. Urine: collecté dans des tubes stériles et centrifugé pendant environ 20 minutes (2000-3000 tr / min). Collectez soigneusement le surnageant. Si un précipité se forme pendant le stockage, centrifugez à nouveau. Pleur et ascite, mise en œuvre de référence du liquide céphalorachidien.
4. Supernage de la culture cellulaire: Lors de la détection des composants sécrétés, collectez avec un tube stérile. Centrifugeuse pendant environ 20 minutes (2000-3000 tr / min). Collectez soigneusement le surnageant. Lors de la détection des composants à l'intérieur des cellules, diluez la suspension cellulaire avec du PBS (pH7.2-7.4) et la concentration cellulaire atteindra environ 1 million / ml. Grâce à la congélation et à la décongélation répétés, les cellules sont détruites et les composants intracellulaires sont libérés. Centrifugeuse pendant environ 20 minutes (2000-3000 tr / min). Collectez soigneusement le surnageant. Si un précipité se forme pendant le stockage, il doit être à nouveau centrifugé.
5. Organisez l'échantillon: après avoir coupé l'échantillon, pesez-le. Ajoutez une certaine quantité de PBS, Ph7.4. Géler rapidement et économiser avec de l'azote liquide pour une utilisation ultérieure. Après que l'échantillon a fondu, il maintient toujours une température de 2-8 ° C. Ajoutez une certaine quantité de PBS (pH7.4) et homogénéisé l'échantillon avec un manuel ou un homogénéisateur. Centrifugeuse pendant environ 20 minutes (2000-3000 tr / min). Collectez soigneusement le surnageant. Après l'aliquoteur, une partie doit être testée et le reste est gelé pour une utilisation future.
6. Le spécimen doit être extrait dès que possible après la collecte. L'extraction doit être effectuée en fonction de la littérature pertinente. L'expérience doit être effectuée dès que possible après l'extraction. Si le test ne peut pas être effectué immédiatement, l'échantillon peut être stocké à -20 ℃, mais la congélation et la décongélation répétés doivent être évités.
7. L'échantillon contenant NAN3 ne peut pas être détecté car Nan3 inhibe l'activité de la peroxydase de raifort (HRP).
Pas:
1. Dilution et chargement des produits standard: Définissez 10 puits standard sur la plaque recouverte d'enzyme, ajoutez 100 μL des produits standard dans les premier et deuxième puits, puis ajoutez les produits standard dans les premier et deuxième puits. 50 μl de diluant, bien mélanger; Ensuite, prenez 100 μl du premier puits et du deuxième puits et ajoutez-les aux troisième et quatrième puits respectivement, puis ajoutez respectivement 50 μl de solution de dilution standard aux troisième et quatrième puits, alors bien prendre 50 μl chacun dans les troisième et quatrième puits et jetez-le, puis ajoutez 50 μl chacun aux cinquième et sixième puits, puis ajoutez 50ul de la solution de dilution standard aux cinquième et sixième puits respectivement, et bien mélanger; Après le mélange, prenez 50 μl des cinquième et sixième puits et ajoutez-les respectivement aux septième et huitième puits. Ajoutez ensuite 50 μl de solution de dilution standard aux septième et huitième puits respectivement. Prenez 50 μl des huit puits et ajoutez-les aux neuvième et dixième puits. Ajoutez ensuite 50 μl de la solution de dilution standard aux neuvième et dixième puits respectivement. Après le mélange, prenez 50 μl des neuvième et dixième puits et jetez. (Après dilution, le volume de chaque puits est de 50 μl et les concentrations sont de 36 pg / ml, 24pg / ml, 12pg / ml, 6pg / ml, 3pg / ml).
2. Ajouter des échantillons: Configurer des puits vierges (les puits de commande vierges n'ajoutent pas d'échantillons et de réactifs enzymatiques, les autres étapes sont les mêmes) et les puits d'échantillon à tester. Ajouter 40 μl de diluant de l'échantillon au puits d'échantillon d'essai de la plaque recouverte d'enzyme, puis ajouter 10 μl de l'échantillon d'essai (la dilution finale de l'échantillon est 5 fois). Ajouter l'échantillon et ajouter l'échantillon au bas du puits de la microplaque, essayez de ne pas toucher la paroi du puits, secouez doucement pour mélanger.
3. Incubation: sceller la plaque avec le film d'étanchéité et incuber à 37 ° C pendant 30 minutes.
4. Solution de mélange: diluer 30 fois (20 fois sur 48T) liquide de lavage concentré avec de l'eau distillée 30 fois (20 fois de 48T) puis utiliser.
5. Lavage: décollez soigneusement le film d'étanchéité, jetez le liquide, séchez, remplissez chaque puits avec la solution de lavage, laissez-le reposer 30 secondes et jetez, répétez 5 fois et séchez.
6. Ajouter l'enzyme: ajouter 50 μl de réactif d'étiquette enzymatique à chaque puits, sauf puits vide.
7. Incubation: l'opération est la même que 3.
8. Lavage: L'opération est la même que 5.
9. Développement des couleurs: ajouter 50 μl de développeur A à chaque puits, puis ajouter 50 μl de développeur B, mélanger doucement et afficher à 37 ℃ pendant 15 minutes dans l'obscurité.
10. terminaison: ajouter 50 μl de solution d'arrêt à chaque puits pour arrêter la réaction (à ce moment, le bleu se transformera en jaune).
11. Détermination: mesurez l'absorbance (valeur OD) de chaque puits en séquence avec le climatiseur vide à zéro et 450 nm de longueur d'onde. La mesure doit être effectuée dans les 15 minutes après l'ajout de la solution finale.
Précautions:
1. Le kit doit être équilibré à température ambiante pendant 15 à 30 minutes avant d'être retiré de l'environnement réfrigéré. Si la plaque revêtue d'étiquette enzymatique n'est pas ouverte, la bande doit être stockée dans un sac scellé.
2. Les cristaux peuvent être précipités dans le liquide de lavage concentré, qui peut être chauffé et dissous dans un bain d'eau pendant la dilution, et les résultats ne seront pas affectés pendant le lavage.
3. L'échantillonneur doit être utilisé à chaque étape de l'addition d'échantillon, et la précision doit être régulièrement vérifiée pour éviter les erreurs de test. Il est préférable de contrôler le temps d'échantillonnage dans les 5 minutes. S'il existe de nombreux spécimens, il est recommandé d'utiliser un pistolet à volley pour ajouter des échantillons.
4. Veuillez faire une courbe standard en même temps de chaque mesure, il est préférable de faire un double trou. Si le contenu de la substance à tester dans l'échantillon est trop élevé (la valeur OD de l'échantillon est supérieure à la valeur OD du premier puits standard), veuillez le diluer avec un certain multiple (n fois) de le diluant de l'échantillon puis le détermine. Multiple (× n × 5).
5. Le film d'étanchéité est limité à une utilisation ponctuelle pour éviter la contamination croisée.
6. Veuillez garder le substrat loin de la lumière.
7. Suivez strictement les instructions et les résultats des tests doivent être déterminés par le lecteur de microplaques.
8. Tous les échantillons, liquides de lavage et divers déchets doivent être traités comme des agents infectieux.
9. Les composants de différents lots de ce réactif ne doivent pas être mélangés.
10. S'il y a une différence avec le manuel anglais, le manuel anglais prévaudra.
Calcul:
Prendre la concentration de la norme comme l'abscisse et la valeur OD comme ordonnée, dessinez une courbe standard sur le papier de coordonnées et trouvez la concentration correspondante de la courbe standard en fonction de la valeur OD de l'échantillon; Multipliez ensuite par le facteur de dilution; Calculez l'équation de régression linéaire de la courbe standard avec la valeur OD, remplacez la valeur OD de l'échantillon dans l'équation, calculez la concentration de l'échantillon et multipliez-la par le facteur de dilution pour obtenir la concentration réelle de l'échantillon.
(Cette image est pour référence uniquement)
Performance du kit:
1. Le coefficient de corrélation r entre la régression linéaire de l'échantillon et la concentration attendue est supérieure à 0,990.
2. Le lot et l'approbation doivent être inférieurs à 9% et 11% respectivement
Plage d'examen:
1pg / ml -45pg / ml
Conditions de stockage et période de validité:
1. Stockez le kit: 2-8 ℃.
2. Validité: 6 mois