Porcine β-humain chorionique gonadotrophine (β-HCG) Enzyme Le kit d'immuno-essai du kit d'immunoosage Ce kit est pour la recherche uniquement.
Nom du médicament:
Nom générique: porcin bêta humain chorionique gonadotrophine (β-hcg) kit ELISA
But d'utilisation:
Ce kit est utilisé pour la détermination de la gonadotrophine chorionique β-humaine (β-HCG) dans le sérum de porc, le plasma et les échantillons de liquide associés.
Principe expérimental:
Ce kit utilise la méthode sandwich à double anticorps pour déterminer le niveau de gonadotrophine chorionique β-humaine porcine (β-HCG) dans l'échantillon. Les plaques microporeuses ont été recouvertes d'un anticorps de gonadotrophine chorionique β-humain (β-HCG) pour la gonadotrophine chorionique (β-HCG) purifiée pour fabriquer des anticorps en phase solide. La gonadotrophine chorionique β-humaine porcine (β-HCG), puis combinée avec un anticorps β (β-HCG) à la gonadotropine β (β-HCG) marquée par HRP pour former un complexe d'anticorps anticorps antigène-enzyme, et après un lavage complet, le TMB du substrat est ajouté pour le développement des couleurs. Le TMB est converti en bleu sous la catalyse de l'enzyme HRP et en jaune final sous l'action de l'acide. La profondeur de la couleur est positivement corrélée avec la gonadotrophine villous humaine β (β-HCG) dans l'échantillon. L'absorbance (valeur OD) a été mesurée avec un lecteur de microplaques à une longueur d'onde de 450 nm, et la concentration de gonadotrophine chorionique β-humaine porcine (β-HCG) dans l'échantillon a été calculée par une courbe standard.
Composition du kit:
1 20 fois la solution de lavage concentrée 30 ml × 1 bouteille 7 Solution d'arrêt 6 ml × 1 bouteille
2 Étiquette enzymatique Réactif 6 ml × 1 bouteille 8 Standard (270 μg / L) 0,5 ml × 1 bouteille
3 Étiquette enzymatique Plaque revêtue 12 puits × 8 bandes 9 dilutions standard 1,5 ml × 1 bouteille
4 échantillon diluant 6 ml × 1 bouteille 10 instructions 1 copie
5 Développeur Une solution 6 ml × 1 bouteille 11 2 Film d'étanchéité
6 Développeur B Liquide 6 ml × 1 / bouteille 12 Sac scellé 1
Exigences d'échantillon:
1. Les échantillons sont extraits dès que possible après la collecte, et l'extraction est effectuée en fonction de la littérature pertinente, et les expériences doivent être menées dès que possible après l'extraction. Si le test ne peut pas être effectué immédiatement, l'échantillon peut être stocké à -20 ℃, mais la congélation et le dégel répétés doivent être évités
2. Les échantillons contenant NAN3 ne peuvent pas être détectés car Nan3 inhibe l'activité de la peroxydase de raifort (HRP).
Pas:
1. Dilution et chargement des produits standard: Définissez 10 puits standard sur la plaque recouverte d'enzyme, ajoutez 100 μL des produits standard dans les premier et deuxième puits, puis ajoutez les produits standard dans les premier et deuxième puits. 50 μl de diluant, bien mélanger; Ensuite, prenez 100 μl du premier puits et du deuxième puits et ajoutez-les aux troisième et quatrième puits respectivement, puis ajoutez respectivement 50 μl de solution de dilution standard aux troisième et quatrième puits, alors bien prendre 50 μl chacun dans les troisième et quatrième puits et jetez-le, puis ajoutez 50 μl chacun aux cinquième et sixième puits, puis ajoutez 50ul de la solution de dilution standard aux cinquième et sixième puits respectivement, et bien mélanger; Après le mélange, prenez 50 μl des cinquième et sixième puits et ajoutez-les respectivement aux septième et huitième puits. Ajoutez ensuite 50 μl de solution de dilution standard aux septième et huitième puits respectivement. Prenez 50 μl des huit puits et ajoutez-les aux neuvième et dixième puits. Ajoutez ensuite 50 μl de la solution de dilution standard aux neuvième et dixième puits respectivement. Après le mélange, prenez 50 μl des neuvième et dixième puits et jetez. (Après dilution, le volume de chaque puits est de 50 μl et les concentrations sont de 180 μg / L, 120 μg / L, 60 μg / L, 30 μg / L, 15 μg / L).
2. Ajouter des échantillons: Configurer des puits vierges (les puits de commande vierges n'ajoutent pas d'échantillons et de réactifs enzymatiques, les autres étapes sont les mêmes) et les puits d'échantillon à tester. Ajouter 40 μl de diluant de l'échantillon au puits d'échantillon d'essai de la plaque recouverte d'enzyme, puis ajouter 10 μl de l'échantillon d'essai (la dilution finale de l'échantillon est 5 fois). Ajouter l'échantillon et ajouter l'échantillon au bas du puits de la microplaque, essayez de ne pas toucher la paroi du puits, secouez doucement pour mélanger.
3. Incubation: sceller la plaque avec le film d'étanchéité et incuber à 37 ° C pendant 30 minutes.
4. Solution de mélange: diluer 20 fois le liquide de lavage concentré avec de l'eau distillée 20 fois et réserver
5. Lavage: décollez soigneusement le film d'étanchéité, jetez le liquide, séchez, remplissez chaque puits avec la solution de lavage, laissez-le reposer 30 secondes et jetez, répétez 5 fois et séchez.
6. Ajouter l'enzyme: ajouter 50 μl de réactif d'étiquette enzymatique à chaque puits, sauf puits vide.
7. Incubation: l'opération est la même que 3.
8. Lavage: L'opération est la même que 5.
9. Développement des couleurs: ajouter 50 μl de développeur A à chaque puits, puis ajouter 50 μl de développeur B, mélanger doucement et développer la couleur à 37 ℃ dans l'obscurité
15 minutes.
10. terminaison: ajouter 50 μl de solution d'arrêt à chaque puits pour arrêter la réaction (à ce moment, le bleu se transformera en jaune).
11. Détermination: mesurez l'absorbance (valeur OD) de chaque puits en séquence avec le climatiseur vide à zéro et 450 nm de longueur d'onde. La mesure doit être effectuée dans les 15 minutes suivant l'ajout de la solution d'arrêt.
Calcul:
Prendre la concentration de la norme comme l'abscisse et la valeur OD comme ordonnée, dessinez une courbe standard sur le papier de coordonnées et trouvez la concentration correspondante de la courbe standard en fonction de la valeur OD de l'échantillon; multiplier par le facteur de dilution; ou utilisez la concentration de la norme Calculer l'équation de régression linéaire de la courbe standard avec la valeur OD, remplacer la valeur OD de l'échantillon dans l'équation, calculer la concentration de l'échantillon et le multiplier par le facteur de dilution pour obtenir la concentration réelle de la concentration réelle l'échantillon.
Précautions:
1. Le kit doit être retiré de l'environnement réfrigéré et équilibré à température ambiante pendant 15-30 minutes avant utilisation. Si la plaque enveloptée enzymatique est non scellée après l'ouverture, la bande doit être stockée dans un sac scellé.
2. Les cristaux peuvent être précipités dans le liquide de lavage concentré, qui peut être chauffé et dissous dans un bain d'eau pendant la dilution, et les résultats ne seront pas affectés pendant le lavage.
3. L'échantillonneur doit être utilisé à chaque étape de l'addition d'échantillon, et la précision doit être régulièrement vérifiée pour éviter les erreurs de test. Il est préférable de contrôler le temps d'échantillonnage dans les 5 minutes. S'il existe de nombreux spécimens, il est recommandé d'utiliser un pistolet à volley pour ajouter des échantillons.
4. Veuillez faire une courbe standard en même temps de chaque mesure, il est préférable de faire un double trou. Si le contenu de la substance à tester dans l'échantillon est trop élevé (la valeur OD de l'échantillon est supérieure à la valeur OD du premier puits standard), veuillez le diluer avec un certain multiple (n fois) de le diluant de l'échantillon puis le détermine. Multiple (× n × 5).
5. Le film d'étanchéité est limité à une utilisation ponctuelle pour éviter la contamination croisée.
6. Veuillez garder le substrat loin de la lumière.
7. Suivez strictement les instructions et les résultats des tests doivent être déterminés par le lecteur de microplaques.
8. Tous les échantillons, liquides de lavage et divers déchets doivent être traités comme des agents infectieux.
9. Les composants de différents lots de ce réactif ne doivent pas être mélangés.
10. S'il y a une différence avec le manuel anglais, le manuel anglais prévaudra.
Plage d'examen:
10 μg / L -200 μg / L
spécification:
96 PERRIRES / CONDITIONS DE STOCKAGE ET DATE D'EXPIRATION
1. Stockage du kit :; 2-8 ℃.
2. Validité: 6 mois